摘要：目的運用CRISPR/Cas9技術構建EIF5A2基因敲除Cal27細胞系,觀察EIF5A2在口腔鱗狀細胞癌增殖與遷移中的作用。方法根據(jù)EIF5A2基因結構域,設計2個CRISPR靶向位點,利用pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin構建2個導向RNA(sgRNA)質粒。將sgRNA質粒與pST1374-NLS-flag-linker-Cas9共轉染至Cal27細胞中,用嘌呤霉素和殺稻瘟菌素篩選,并挑取單克隆。將單克隆細胞的DNA進行目的片段擴增,經凝膠電泳及測序鑒定后篩選出大片段敲除細胞株Cal27-2C5及堿基突變株Cal27-2D1。real time PCR及WesternBlot鑒定兩株細胞系中EIF5A2的表達情況。用Transwell實驗及CCK8分別檢測EIF5A2敲除對Cal27細胞的體外遷移能力及體外增殖能力的影響。結果與對照組相比,Cal27-2C5及Cal27-2D1細胞株中EIF5A2在mRNA水平上表達均明顯降低。在蛋白水平上,Cal27-2C5及Cal27-2D1細胞株中EIF5A2蛋白均基本不表達。敲除EIF5A2可明顯降低Cal27細胞的體外遷移能力,而對Cal27細胞體外增殖能力沒有明顯影響。結論成功構建EIF5A2基因敲除Cal27細胞株Cal27-2C5和Cal27-2D1,并初步驗證EIF5A2可以影響Cal27細胞的體外遷移能力。