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百合谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶基因(LotGSTL)的克隆及原核表達

作者:邊曉天邵楊張克中; 崔金騰; 葛偉; 賈月慧 北京農(nóng)學(xué)院園林學(xué)院; 北京102206; 北京農(nóng)學(xué)院; 城鄉(xiāng)生態(tài)環(huán)境北京實驗室; 北京102206; 北京鄉(xiāng)村景觀規(guī)劃設(shè)計工程技術(shù)研究中心; 北京102206; 北京農(nóng)學(xué)院植物科技學(xué)院; 北京102206

摘要:采用RACE技術(shù),克隆OT百合‘Robina’(Lilium OT hybrids’Robina’)中編碼谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶基因LotGSTL,對其進行了生物信息學(xué)分析,研究了該基因在不同組織中的表達特性,并對該基因進行原核表達。結(jié)果顯示:該基因全長800 bp,ORF為717 bp,編碼238個氨基酸。氨基酸序列比對及系統(tǒng)分析表明,該基因與擬南芥的兩個Lambda類GST基因聚為一類,初步確定為百合Lambda類GST基因,命名為LotGSTL。生物信息學(xué)分析表明,LotGSTL蛋白含有典型的GST蛋白保守結(jié)構(gòu)域,為親水性蛋白,無跨膜結(jié)構(gòu),分子量為27 278.2 Da,理論等電點為5.2,分子式為C1257H1933N309O361S4,可能存在14個磷酸化位點。建立了穩(wěn)定的LotGSTL1原核表達體系,原核表達的LotGSTL1蛋白大約為27 kD,與預(yù)測的蛋白相對分子量一致。分析了LotGSTL基因在不同器官中的表達模式,發(fā)現(xiàn)其在花、葉、根、鱗莖中表達量均較高,而莖中表達量較低,相對表達量依次為:花>葉>根>鱗莖>莖。該研究將為解析百合LotGSTL基因的抗逆功能提供幫助,對于未來百合抗逆分子育種的研究有所幫助。

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