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巢式PCR早期檢測(cè)實(shí)驗(yàn)大鼠卡氏肺孢子蟲

作者:張小娟; 楊芳芳; 歐陽(yáng)頤; 王鴿; 黎學(xué)銘; 林睿 廣西醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)教研室; 南寧530021; 廣西疾病預(yù)防控制中心; 南寧530028

摘要:目的探討ITS1-5.8S rRNA—ITS2巢式PCR法檢測(cè)大鼠卡氏肺孢子蟲的敏感性及早期檢測(cè)的評(píng)估。方法采用地塞米松免疫抑制法誘導(dǎo)大鼠感染肺孢子蟲,大鼠分為7組,6組實(shí)驗(yàn)組和1組對(duì)照組,每組10只,實(shí)驗(yàn)組采用地塞米松免疫抑制法誘導(dǎo)大鼠感染肺孢子蟲,對(duì)照組則不予激素處理。自誘導(dǎo)開始第3周至第8周每周收集1組實(shí)驗(yàn)組大鼠肺組織(1ungtissue,LT)和支氣管肺泡灌洗液(bronchoal veolar lavage fluid,BALF)標(biāo)本,采用ITSl-5.8SrRNA—ITS2巢式PCR法擴(kuò)增卡氏肺孢子蟲ITSI-5.8SrRNA—ITS2,同時(shí)采用六亞甲基四胺銀(GMS)染色鏡檢法對(duì)第3周到第8周的大鼠肺組織和肺泡灌洗液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),并將兩種方法進(jìn)行比較以評(píng)估巢式PCR技術(shù)的敏感性。結(jié)果采用ITSI-5,8SrRNA—ITS2巢式PCR法對(duì)實(shí)驗(yàn)感染卡氏肺孢子蟲的大鼠¨和BALF進(jìn)行檢測(cè),卡氏肺孢子蟲DNA陽(yáng)性率依次為第3周20%(2/10)、0(0/10),第4周70%(7/10)、10%(1/10),第5周90%(9/10)、30%(3/10),第6周90%(9/10)、80%(8/10),第7周100%(10/10)、80%(8/10),第8周63%(5/8)、63%(5/8)。而GMS染色鏡檢法僅于第5周開始檢出卡氏肺孢子蟲包囊,第6、7周包囊數(shù)最多。實(shí)驗(yàn)組大鼠誘導(dǎo)后的前4周無(wú)明顯卡氏肺孢子蟲肺炎體征,第5周后癥狀趨于明顯。結(jié)論ITSI-5.8SrRNA-ITS2巢式PCR法敏感性高,可在第3周后和無(wú)癥狀階段實(shí)驗(yàn)大鼠中檢出卡氏肺孢子蟲,并且比鏡檢法早兩周。

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