杜仲EuCHIT1基因表達載體構建及在大腸桿菌中的表達
作者：董旋; 丁延慶; 冉昕; 趙德剛 貴州大學農(nóng)業(yè)生物工程研究院/生命科學學院山地植物資源保護與種質(zhì)創(chuàng)新省部共建教育部重點實驗室; 綠色農(nóng)藥與農(nóng)業(yè)生物工程國家重點實驗室培育基地; 貴州省山地生態(tài)與農(nóng)業(yè)生物工程2011協(xié)同創(chuàng)新中心
摘要：構建了T7啟動子驅(qū)動杜仲幾丁質(zhì)酶基因EuCHIT1的原核表達載體pET-EuCHIT1和pMCSG-EuCHIT1,其表達產(chǎn)物分別含6個組氨酸(6His)標簽和6個組氨酸連接的麥芽糖結(jié)合蛋白(his6-tag–maltose-binding protein,MBP)標簽,分別將重組載體遺傳轉(zhuǎn)化大腸桿菌細胞BL21(DE3),在37℃、150 rpm條件下培養(yǎng)至菌液OD值為0.4~0.8后,轉(zhuǎn)到16℃、150 rpm條件下以1 m MIPTG誘導培養(yǎng)12 h,表達產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE分析,p ET-EuCHIT1/BL21(DE3)表達以包涵體形式存在36.03 kD融合蛋白,pMCSG-EuCHIT1/BL21(DE3)成功表達可溶形式存在的77.21 kD融合蛋白。故可以使用pMCSG-EuCHIT1/BL21(DE3)獲得可溶的融合蛋白,為之后的EuCHIT1的多克隆抗體的制備和及功能研究奠定基礎。
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