時(shí)間:2023-01-03 11:36:09
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菌目的的藥物有哪些?具體抑菌原理是什么?通過將理論知識與臨床藥物相聯(lián)系,使學(xué)生真正了解人類很多疾病的發(fā)生與體內(nèi)生物大分子的結(jié)構(gòu)、代謝、信息傳遞與表達(dá)等問題密切相關(guān),而很多臨床藥物的研發(fā)又是以生化代謝點(diǎn)為藥物靶點(diǎn)的。這樣既可充分調(diào)動(dòng)學(xué)生的積極主動(dòng)性,讓學(xué)生輕松而牢固掌握知識點(diǎn)的同時(shí),亦親身感受到生物化學(xué)與臨床醫(yī)藥學(xué)之間的關(guān)系,明白牢固的生化知識是藥物研發(fā)、生產(chǎn)乃至銷售環(huán)節(jié)的必備基礎(chǔ)知識,為將來從事生物制藥工作打下了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。在這樣的課堂討論中老師要立足于引導(dǎo)的作用,務(wù)必專心傾聽學(xué)生的討論,緊跟學(xué)生們的思路,合適的時(shí)候給出恰當(dāng)?shù)墓膭?lì)和啟發(fā),這樣可極大程度地激發(fā)學(xué)生暢所欲言的熱情,拓寬學(xué)生的思維,進(jìn)而培養(yǎng)他們的創(chuàng)新意識。教學(xué)實(shí)踐發(fā)現(xiàn),經(jīng)過PBL教學(xué)法訓(xùn)練出來的學(xué)生,創(chuàng)新思維能力較強(qiáng),能夠獨(dú)立或借助查閱資料解決學(xué)習(xí)過程中遇到的問題[2],在跟隨老師做科研項(xiàng)目的時(shí)候善于思考和發(fā)現(xiàn)問題,通常也能夠獨(dú)立解決遇到的問題,真正做到自主學(xué)習(xí)能力的提高。對教師來講,不但要求基礎(chǔ)知識牢固,更要緊跟醫(yī)藥科學(xué)發(fā)展前沿,只有這樣才能設(shè)計(jì)出好的PBL問題,對學(xué)生的討論才能給予恰到好處的引導(dǎo)啟發(fā)。此外,通過教師參與學(xué)生的討論,能很好地加強(qiáng)師生之間的交流,便于老師掌握每個(gè)學(xué)生的情況,真正做到因材施教,提高教學(xué)質(zhì)量。
2板書與多媒體結(jié)合
我校制藥工程專業(yè)生物化學(xué)課程在大學(xué)二年級上學(xué)期開設(shè)。此階段專業(yè)基礎(chǔ)課程多,知識量大,因此老師的授課方法和學(xué)生的學(xué)習(xí)效率顯得尤為重要。生物化學(xué)課程知識比較龐雜,每節(jié)課的信息量非常大,加上課堂教學(xué)課時(shí)的減少,學(xué)生課下需要花費(fèi)大量時(shí)間消化。因此,如何讓學(xué)生高效地掌握每節(jié)課所講內(nèi)容顯得至關(guān)重要,而框架式的板書配合多媒體教學(xué)可以較好地緩解這個(gè)矛盾,提高學(xué)生學(xué)習(xí)生物化學(xué)的效率。目前,生物化學(xué)課程多采用多媒體教學(xué),這可在很大程度上提高教師的授課效率,使其在有限的時(shí)間講解更多的內(nèi)容,同時(shí)可借助插圖和動(dòng)畫的生動(dòng)性、直觀性和形象性來幫助學(xué)生理解教學(xué)中的重點(diǎn)和難點(diǎn)[6]。我們在現(xiàn)有教材課件的基礎(chǔ)上,利用平時(shí)積累的教學(xué)素材對課件內(nèi)容、圖表和動(dòng)畫進(jìn)行了完善,使之更加條理清晰、有趣易懂。即使這樣,學(xué)生仍反映生物化學(xué)課程內(nèi)容龐雜,在有限的課堂和課外時(shí)間內(nèi)學(xué)習(xí)起來還是有一定的困難?;诖耍谡n堂的教學(xué)過程中我都會(huì)運(yùn)用板書把每章知識點(diǎn)框架式的總結(jié)出來,便于學(xué)生從宏觀水平理解所學(xué)內(nèi)容,知識點(diǎn)之間的邏輯關(guān)系一目了然,而不是零散的一個(gè)知識點(diǎn)一個(gè)知識點(diǎn)的來記憶。這樣,龐雜的生物化學(xué)知識點(diǎn)對學(xué)生來說就會(huì)簡潔明了不少,學(xué)習(xí)效率和學(xué)習(xí)興趣會(huì)明顯提高。此外,在多媒體教學(xué)過程中,為突出重點(diǎn)和難點(diǎn),我都會(huì)在黑板上寫出關(guān)鍵反應(yīng)的步驟,這會(huì)引起學(xué)生特別的關(guān)注,督促他們做好筆記,更好地提高教學(xué)效果。
3理論與實(shí)踐相結(jié)合
生物化學(xué)是一門專業(yè)基礎(chǔ)課程,也是一門實(shí)踐性很強(qiáng)的課程。為加深學(xué)生對生物化學(xué)知識點(diǎn)的理解,提高其動(dòng)手實(shí)踐能力,培養(yǎng)其在實(shí)踐中分析問題和解決問題的能力,根據(jù)我校制藥工程培養(yǎng)方案和學(xué)生的就業(yè)方向,編寫了適合我校制藥工程專業(yè)學(xué)生使用的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)手冊。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容包括驗(yàn)證性的基礎(chǔ)生化實(shí)驗(yàn)和綜合性實(shí)驗(yàn)。此外,我們還開設(shè)了設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn),讓學(xué)生通過查閱資料,自己設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案,根據(jù)方案解決實(shí)際問題。這樣的教學(xué)安排可激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣,進(jìn)而提高他們解決實(shí)踐問題的能力,為學(xué)生以后的進(jìn)一步發(fā)展奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。此外,在指導(dǎo)學(xué)生做生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)的過程中,根據(jù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容我通常會(huì)提出一些與專業(yè)有關(guān)的小問題,供他們思考。這樣會(huì)促使他們邊做實(shí)驗(yàn)邊思考,有利于加深其對理論知識的理解和掌握[7]。為拓寬學(xué)生的視野,經(jīng)學(xué)校同意,我們還向?qū)W生開放了生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室。結(jié)合教師承擔(dān)的科研項(xiàng)目,鼓勵(lì)學(xué)生按自己的興趣選擇導(dǎo)師,跟隨導(dǎo)師做一些研究工作。優(yōu)秀的學(xué)生可申請市教委或?qū)W校下達(dá)的針對本科生的一些科研項(xiàng)目,在導(dǎo)師的指導(dǎo)下進(jìn)行科研實(shí)踐工作。這樣的政策在我院實(shí)行多年,生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室每年都會(huì)接收多名本科生進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室開展科研立項(xiàng),這不但提高了學(xué)生的動(dòng)手能力,培養(yǎng)了學(xué)生的創(chuàng)新意識,更重要的是提高了他們獨(dú)立分析和解決問題的能力,進(jìn)而激發(fā)了他們對生物醫(yī)藥的極大熱情[8]。
4總結(jié)歸納,突出重點(diǎn)
生物化學(xué)課程知識點(diǎn)非常多,以重要的知識點(diǎn)為中心進(jìn)行總結(jié)歸納既可幫助學(xué)生抓住重點(diǎn),凝煉內(nèi)容,提高其學(xué)習(xí)效率。如講授完遺傳信息傳遞及其調(diào)節(jié)相關(guān)內(nèi)容后,從模板、原料、產(chǎn)物、合成方向、合成方式及參與反應(yīng)有關(guān)的酶等方面列表比較復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯和逆轉(zhuǎn)錄的異同點(diǎn)。物質(zhì)代謝調(diào)控部分,生化反應(yīng)式太多,且各代謝途徑相互交叉,學(xué)生學(xué)習(xí)起來往往感覺無從下手。講授完該部分內(nèi)容后總結(jié)歸納三羧酸循環(huán)、磷酸戊糖循環(huán)、檸檬酸-丙酮酸循環(huán)、鳥氨酸循環(huán)等代謝過程的相互聯(lián)系和生理意義,使這部分內(nèi)容更加清晰易學(xué),利于溝通各部分知識點(diǎn)間的相互關(guān)系并引導(dǎo)學(xué)生系統(tǒng)地整理、掌握所學(xué)知識。筆者多年的教學(xué)效果顯示總結(jié)歸納可顯著提高學(xué)生的學(xué)習(xí)效率??偨Y(jié)歸納的意義在于把所學(xué)的知識系統(tǒng)化、條理化,便于理解記憶,更好地發(fā)揮學(xué)生的主體作用,并可有效克服傳統(tǒng)平鋪直敘講授方式帶來的枯燥乏味,有利于學(xué)習(xí)興趣的培養(yǎng)。另外,為達(dá)到溫故而知新的目的,在每次上課開始簡短地回顧上次課的內(nèi)容,然后開始講述新內(nèi)容,注意內(nèi)容的自然過渡,每次課結(jié)束前將本節(jié)課的內(nèi)容串聯(lián)一遍,這樣更益于學(xué)生鞏固新學(xué)的內(nèi)容。
5結(jié)語
【關(guān)鍵詞】泡桐屬;化學(xué)成分;生物活性
玄參科泡桐屬Paulownia植物,全屬共有7種,分別是白花泡桐[P.fortunei(Seem.)Hemsl.],毛泡桐[P.tomentosa(Thunb.)Steud.],蘭考泡桐(P.elongataS.Y.Hu),椒葉泡桐(P.catalpifoliaGongTong),臺(tái)灣泡桐(P.kawakamiiIto),川泡桐(P.fargesiiFranch.)和南方泡桐(P.australisGongTong),光泡桐[P.tomentosavar.tsinlingensis(Pai)GongTong]是毛泡桐的變種。除東北北部、內(nèi)蒙古、新疆北部、等地區(qū)外全國均有分布,栽培或野生。白花泡桐在越南、老撾也有分布,有些種類已在世界許多國家引種栽培。作為一種優(yōu)質(zhì)木材,它不僅在工農(nóng)業(yè)方面有廣泛用途,同時(shí)它還是一種常用的中草藥,其花、葉、皮、根、果古時(shí)就有其藥用記載。如《本草綱目》記述:“桐葉……主惡蝕瘡著陰,皮主五痔,殺三蟲。花主傅豬瘡,消腫生發(fā)[1]?!薄端幮哉摗芬惭?“治五淋,沐發(fā)去頭風(fēng),生發(fā)滋潤?!苯陙磲t(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)其主要作用有:抗菌消炎,止咳利尿,降壓止血,同時(shí)還具有殺蟲作用。
1化學(xué)成分
泡桐屬植物的化學(xué)成分研究始于20世紀(jì)30年代初。日本學(xué)者最先對泡桐屬植物的化學(xué)成分進(jìn)行了研究,1931年MascoKazi等從泡桐葉的樹皮和樹葉中分離得到糖苷類化合物[2,3]。1959年,KazutoruYoneichi研究了桐木中的木脂素成分,分離得到了丁香苷。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,各種色譜分離方法和現(xiàn)代波譜技術(shù)應(yīng)用于天然產(chǎn)物的研究,從泡桐屬植物中不斷發(fā)現(xiàn)新化合物。該屬植物中所含化學(xué)成分類型主要有環(huán)烯醚萜苷、苯丙素、木脂素苷、黃酮、倍半萜、三萜等。其中許多化合物被證明具有一定的生物活性。
1.1苯丙素類化合物苯丙素類化合物在泡桐屬植物中分布較為廣泛。主要有:(1)木脂素(四氫呋喃駢四氫呋喃類):細(xì)辛素(d-Asarinin)[4],芝麻素(d-Sesamin)[5],泡桐素(Paulownin)[6],異泡桐素(Isopaulownin)、(+)-Piperitol[7]等。(2)苯丙素酚類:Verbascoside[8],Isoverbascoside[9]。
1.2環(huán)烯醚萜類富含環(huán)烯醚萜類成分是泡桐屬植物的一大特征,在該屬植物中多以成苷的形式出現(xiàn),廣泛分布于桐木、桐皮、桐葉中,花中還未見文獻(xiàn)報(bào)道。泡桐屬中的環(huán)烯醚萜成分具有九碳骨架(即C-4去甲基)的環(huán)戊烷型、環(huán)戊烯型和7,8環(huán)氧戊烷型,顯示了其在植物分類學(xué)上的意義。其取代基位置比較固定,一般1位羥基與1分子葡萄糖成苷,8位為甲基或羥甲基。另外,Soern等從成年毛泡桐的葉部獲得兩個(gè)5,6位為雙鍵的環(huán)烯醚萜苷,同時(shí),他還發(fā)現(xiàn)成年和幼年的毛泡桐中環(huán)烯醚萜苷成分有所不同[10~14]。
1.3倍半萜類李志剛等[15]從毛泡桐的花中分到7個(gè)落葉酸型的倍半萜,為首次從該屬植物中分到倍半萜類化合物,可能與該類激素促進(jìn)開花,抑制種子發(fā)芽有關(guān),其他部分未發(fā)現(xiàn)。
1.4甘油酯類杜欣等[16]從毛泡桐的花中還分到了甘油酯類的化合物及其苷。
1.5其他成分從該屬植物中還分離出黃酮類、二氫黃酮類、三萜(主要為熊果酸及其苷[17])、生物堿、多酚、單糖、鞣酸、脂肪酸等多種成分。另外,栗原滕三郎和宋永芳等[18]對泡桐花的精油成分作了色譜、質(zhì)譜分析,研究了其中的蛋白質(zhì)、氨基酸、微量元素等營養(yǎng)成分,利用GC/MS技術(shù)鑒定出許多長鏈及芳香族化合物。
1.6植物激素王文芝等[19]對河南蘭考泡桐的根、莖、葉中的植物激素進(jìn)行了研究,利用HPLC技術(shù)分離鑒定出了激動(dòng)素、反式玉米素、激動(dòng)素核酸等8種激素。
2生物活性
2.1抗菌作用芝麻素對結(jié)核桿菌有抑制作用[20],而泡桐花及其果實(shí)的注射液(醇提取后用醋酸鉛沉淀去雜質(zhì)制成),體外實(shí)驗(yàn)時(shí)對金黃色葡萄球菌及傷寒桿菌、痢疾桿菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、布氏桿菌、革蘭菌、酵母菌等均有一定的抑制作用[4]。從泡桐屬植物中分到的紫葳新苷Ⅰ對金黃色葡萄球菌和乳鏈球菌均有抑制作用,最小濃度為150μg/ml,并認(rèn)為其角甲基是抗菌必要基團(tuán)[21]。魏希穎等將泡桐花的黃酮提取物作了體外抑菌實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)其對金黃色葡萄球菌作用最強(qiáng),而對黑曲霉、啤酒酵母、產(chǎn)黃青霉無明顯的抑制作用[22]。
2.2治療氣管炎泡桐果及花治療慢性氣管炎有一定療效,臨床治療1341例,有效率為81%,其中臨床控制率7%,顯效25%[23]。
2.3消炎作用泡桐花可用于治療炎癥感染,臨床報(bào)道用其治療16種疾病計(jì)244例,均有一定療效,其中對上感、支氣管肺炎、急性扁桃體炎、菌痢、急性腸炎、急性結(jié)膜炎的療效較好,治療中未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)和副作用[4]。實(shí)驗(yàn)中通過觀察泡桐花浸膏對哮喘豚鼠肺病理組織學(xué)的影響發(fā)現(xiàn)泡桐花浸膏能明顯延長豚鼠誘喘潛伏期,優(yōu)于地塞米松(P<0.001);對肺組織炎性細(xì)胞浸潤有明顯的抑制作用。能減輕炎癥反應(yīng)對哮喘豚鼠肺組織結(jié)構(gòu)的破壞[24]。李寅超等通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)泡桐果總黃酮及揮發(fā)油可通過抑制支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的血嗜酸粒細(xì)胞(EOS)聚集而具有一定的抗哮喘氣道變應(yīng)性炎癥的作用[25]。
2.4止血作用泡桐屬植物中所含丁香苷有明顯止血作用。本品注射液用于手術(shù)70例,良效(明顯止血)30例,占42.9%,有效(出血減少)26例,占37.1%,無效14例[26]。
2.5毒性研究小鼠口服泡桐果乙醇提取物半數(shù)致死量為21.4g生藥/kg。大鼠口服2g/(kg·d),共21天,一般情況及體重均無異常,內(nèi)臟病理檢查未見中毒性病理形態(tài)改變。家兔急性、亞急性毒理實(shí)驗(yàn)中,泡桐果煎劑對心、肝、腎、脾、胃均無毒性病理改變。家兔灌服泡桐花浸膏或靜脈注射,一般情況及食欲、體重、白細(xì)胞等均無明顯變化,成人口服上述浸膏或肌肉注射,自覺癥狀、體溫、脈搏及白細(xì)胞數(shù)等均無明顯改變,但有輕度血壓下降[4]。已有報(bào)道苯丙素苷具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、清除自由基、延緩骨骼肌疲勞、DNA堿基修復(fù)、抗凝血、抗血小板凝聚等多種生理活性。從泡桐屬植物的樹皮和莖部分離得到一個(gè)新的呋喃醌酮(methyl-5-hydroxy-dinaphtho[1,2-2′,3′]furan-7,12-dione-6-carboxylate),對hela癌細(xì)胞有抑制作用,對polio病毒的brunhildeⅠ型EC50為0.1μg/ml對leonⅢ型EC50為0.1μg/ml[27]。另外,咖啡酸的糖酯類化合物被認(rèn)為與該植物的顏色改變有關(guān)[28]。
2.6殺蟲作用泡桐素、芝麻素可增強(qiáng)殺蟲劑除蟲菊酯的殺蟲作用,可有效殺滅蚊蠅及其幼體[29]。
2.7其他作用泡桐屬植物還具有止咳、平喘、祛痰、治手足癬與燒傷、消腫、生發(fā)等功效[4]。
從以上可知,泡桐屬植物化學(xué)成分療效顯著且具多樣化,但對該屬植物的成分研究多集中于毛泡桐種,其他種涉及較少,而對部位的研究則多為桐葉,皮、根,莖次之,花研究的最少。對生物活性的研究則不夠深入,其有效部位及有效成分有待進(jìn)一步確定。
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TALE只在β-和γ-變形細(xì)菌中被發(fā)現(xiàn),大部分已知的TALE集中分布在植物病原細(xì)菌的黃單胞菌屬Xantomonasspp.中,每個(gè)細(xì)菌中含有1至多個(gè)TALE不等()。AvrBs3和AvrBs4兩側(cè)分布反向重復(fù)序列,推測它們是基因水平轉(zhuǎn)移獲得(Bonasetal.,1993)。另外,水稻白葉枯黃單胞菌(X.oryzaepv.oryzae,Xoo)中利用AvrBs3作為探針鑒定了一系列TALE的T3SEs,如avrXa5、avrXa和avrXa10(Hopkinsetal.,1992)。其它菌屬中也發(fā)現(xiàn)了同源的TALE,如茄科雷爾氏菌R.solanacearum中也有TALE(RipTALs)的報(bào)道,Brg11較黃單胞菌屬中的TAL有偏好的RVDS,激活寄主含有EBE(effector-bindingelement)的基因轉(zhuǎn)錄促進(jìn)致病(deLangeetal.,2013;deLangeetal.,2014)。伯克霍爾德菌屬(Burkholderiarhizoxinica)中同源效應(yīng)物(bats)E5A-W45、E5AV36被報(bào)道含有T3S分泌信號,但是缺少可識別的NLSS和轉(zhuǎn)錄激活區(qū),它們的重復(fù)區(qū)和黃單胞菌屬中的TALEs有差異(Schornacketal.,2013;Bochetal.,2014)。黃單胞菌屬(Xanthomonas)亦稱黃單胞桿菌屬,是由W.J.Dowson于1939年建立的模式病原細(xì)菌,代表種有:(1)十字花科黑腐病菌(X.campestrispv.campestris,Xcc),維管束寄生菌,引起十字花科植物的黑腐病(blackrot),葉緣葉脈變黑,相鄰的葉肉組織枯死,呈黃褐色“V”型壞死;(2)水稻白葉枯黃單胞菌(X.oryzaepv.oryzae,Xoo),葉肉寄生菌,引起水稻白葉枯病(bacterialleafblight);(3)辣椒斑點(diǎn)致病變種(X.campestrispv.vesicatoria,Xcv),葉肉寄生菌,引起辣椒斑點(diǎn)病(bacterialspeckofpepper)。已報(bào)道的10大植物病原菌排行版上,黃單胞菌黑腐病致病變種占據(jù)3大席位(Mansfieldetal.,2012),分別為:(1)丁香假單胞菌(Pseudomonassyringaepathovars);(2)茄科羅爾斯通氏菌(Ralstoniasolanacearum);(3)根癌農(nóng)桿菌(Agrobac-teriumtumefaciens);(4)黃單胞菌水稻白葉枯致病變種(Xanthomonasoryzaepv.oryzae);(5)黃單胞菌十字花科黑腐病致病變種(Xanthomonascampestrispathovars);(6)黃單胞菌地毯草致病變種(Xanthomonasaxonopodispathovars);(7)解淀粉歐文氏菌(Erwiniaamylovora);(8)苛養(yǎng)木桿菌(Xylellafastidiosa);(9)馬鈴薯黑脛病菌Dickeya(dadantiiandsolani);(10)果膠桿菌胡蘿卜軟腐病(Pectobacteriumcarotovorum)/黑脛病菌(Pecto-bacteriumatrosepticum)。
2.寄主抗性識別機(jī)制及TALE致病性
2.1寄主和病原菌相互作用
寄主和病原菌相互作用被認(rèn)為是從PAMPs/M-AMPs(pathogenormicrobe-associatedmolecularpatt-erns)的識別開始的。病原菌的PAMPs/MAMPs相當(dāng)保守,不同的PAMPs/MAMPs被定位在寄主細(xì)胞膜上的形態(tài)識別受體PRRs(patternrecognitionrecep-tors)特異性識別從而激活寄主的基礎(chǔ)防御反應(yīng),這對植物免疫致病菌或非致病菌相當(dāng)重要(JonesandDa-ngl,2006)。研究比較清楚的PAMPs包括微生物的鞭毛組分Flg22、Harpins、冷休克蛋白、脂多糖、肽聚糖和延伸因子Tu(EF-Tu)等(Kunzeetal.,2004;Nürnbe-rgeretal.,2004;Zipfeletal.,2004)。PAMPs被PRRs識別觸發(fā)一個(gè)叫做PTI(PAMP-triggeredimmunity)的基礎(chǔ)防御反應(yīng),該基礎(chǔ)防御反應(yīng)參與誘導(dǎo)MAPK信號通路、鈣通量、產(chǎn)生一氧化氮和活性氧分子和激活WRKY轉(zhuǎn)錄因子(Nürnbergeretal.,2004;Heetal.,2006)。PTI介導(dǎo)的基礎(chǔ)免疫有效地限制了絕大多數(shù)潛在的病原體的生長,是在大多數(shù)植物中廣泛存在的基礎(chǔ)防御反應(yīng)(JonesandDangl,2006)。隨著寄主PTI的加強(qiáng),病原細(xì)菌相應(yīng)地進(jìn)化出了效應(yīng)物激活的寄主感病性ETS(effector-triggeredsusceptibility),即利用T3SEs抑制寄主的PTI信號達(dá)到致病的目的(JonesandDangl,2006)。與病原細(xì)菌ETS(effector-triggeredsusceptibility)相對應(yīng)地,寄主則又進(jìn)化出了特異識別T3SEs的抗性(resistance)基因激活免疫反應(yīng),效應(yīng)物激活的寄主免疫反應(yīng)稱為ETI(effector-triggeredimmunity)(JonesandDangl,2006)。效應(yīng)物作用和修改寄主蛋白或效應(yīng)物自身被寄主抗性R蛋白(resistanceprotein)識別即誘導(dǎo)ETI,ETI是植物的第二級防御策略,通過胼胝質(zhì)沉積加厚細(xì)胞壁、阻斷維管束的運(yùn)輸、抗病相關(guān)蛋白的表達(dá)、氧自由基的釋放和細(xì)胞程序性死亡等。植物通過不斷進(jìn)化的R基因響應(yīng)植物致病菌的挑戰(zhàn),提供了監(jiān)測植物病原效應(yīng)物的又一途徑(Chisholmetal.,2006;MaandGuttman,2008)。由于R基因的存在,ETI改變相互作用的結(jié)果從感病回到抗病??傊≡图闹骰プ鞲爬ㄆ饋砭褪侨N情況:(1)微生物引發(fā)植物的PTI,植物啟動(dòng)防御系統(tǒng),激活抗病基因的表達(dá),如轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子WRKY表達(dá)激活下游抗病基因表達(dá),微生物不能引起致病,植物表現(xiàn)為抗性寄主;(2)微生物引發(fā)植物的PTI,但是微生物利用Ⅲ型效應(yīng)物抑制寄主的PTI引起致病,植物表現(xiàn)為感病寄主;(3)微生物引發(fā)植物的PTI,微生物利用Ⅲ型效應(yīng)物抑制寄主的PTI,寄主進(jìn)化出一系列的監(jiān)守R基因抑制效應(yīng)物的作用,植物表現(xiàn)為抗性寄主(Chisholmetal.,2006;MaandGuttman,2008)。
2.2植物富含LRR結(jié)構(gòu)域蛋白
植物的抗性R蛋白因含有核酸結(jié)合區(qū)和富含亮氨酸重復(fù)區(qū)常歸為NB-LRR(nucleotidebinding-leuc-inerichrepeat)蛋白家族。這些特別的免疫蛋白介導(dǎo)不同的抗性蛋白-效應(yīng)物蛋白識別過程和激活寄主潛在的防御反應(yīng)NB-LRRs呈現(xiàn)多功能域結(jié)構(gòu),每個(gè)功能域依據(jù)NB-LRR信號行使不同的功能。NB-LRR的功能和相關(guān)信號的復(fù)雜度是和植物-微生物互作相對應(yīng)的(Elmoreetal.,2011)。亮氨酸重復(fù)區(qū)LRRs廣泛存在于真白質(zhì)中,參與蛋白-蛋白互作。一般情況下,LRR功能域包括20~29個(gè)氨基酸,其保守的11個(gè)殘基片段序列為LxxLxLxxN/cxL(x代表任意一個(gè)氨基酸,L代表纈氨酸,異亮氨酸或苯丙氨酸)(KobeandKajava,2001)。如擬南芥PRRs鞭毛識別蛋白FLS2,延伸因子識別蛋白EFR,及水稻中的R蛋白Xa21都分別包含一個(gè)胞外28LRRs、21LRRs和23LRRs的結(jié)構(gòu)域(Songetal.,1995;Gómez-GómezandBoller,2000;Zipfeletal.,2006)。LRR蛋白的保守的β折疊和鄰近的松散區(qū)域是一個(gè)11個(gè)殘基的片段,其序列為LxxLxLxxN/CxL,剩下的區(qū)域可能高度不同,目前的分子模型認(rèn)為20個(gè)或30個(gè)殘基長的LRR區(qū)域其核心的LxxLxL序列足以構(gòu)成馬蹄形結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)。目前,包括LRRs的蛋白至少有7個(gè)不同亞族,在許多重要的生理過程提供了形成蛋白質(zhì)相互作用的一個(gè)通用的結(jié)構(gòu)框架(KobeandKajava,2001)。PRRs激活的寄主免疫反應(yīng)在植物和微生物的互作中發(fā)揮了重要的作用。隨著對PRRs研究的深入,值得一提的是,關(guān)于動(dòng)物免疫相關(guān)的形態(tài)識別受體PRRs的發(fā)現(xiàn)贏得了2011年諾貝爾獎(jiǎng)。許多植物抗性R蛋白及形態(tài)識別受體PRRs富含LRR(KobeandKajava,2001;Elmoreetal.,2011)。PRRs富含亮氨酸重復(fù)區(qū)LRRs(leucine-richrepeats)或細(xì)胞溶酶結(jié)構(gòu)域(lysin-motif,LysM)。PRRs包含受體類激酶(re-ceptor-likekinases,RLKs)和受體類蛋白(receptor-likeproteins,RLPs),通常RLKs為跨膜蛋白,包含胞質(zhì)外受體域LRRs和胞質(zhì)內(nèi)激酶域2部分,RLPs沒有胞質(zhì)內(nèi)激酶域(Albrechtetal.,2012)。效應(yīng)物的識別被認(rèn)為是改變了NB-LRRs的構(gòu)象,因而NB-LRR蛋白被釋放激活下游的免疫反應(yīng)的信號(TakkenandTameling,2009)。研究表明,一些核定位的NBS-LRRs的積累和激活對于植物免疫反應(yīng)是必需的,如大麥(Barley)的CC-NB-LRRMLA10、擬南芥(Arabidopsis)的TIR(toll-interleukin1recep-tor)-NB-LRRs/RRS1-R、RPS4和SNC1蛋白的累積和激活都是免疫反應(yīng)所必需的(Deslandesetal.,2003;Burch-Smithetal.,2007;Wirthmuelleretal.,2007;Chengetal.,2009)。
2.3TALE與R基因識別
在植物-病原菌互作過程中,存在基因-基因的識別現(xiàn)象,當(dāng)植物中有抗性(Resistance,R)基因與病原菌無毒(Avirulence,Avr)基因相對應(yīng)識別時(shí),植物表現(xiàn)出非親和互作的抗性;反之,植物-病原菌缺乏這種基因-基因識別時(shí),寄主表現(xiàn)出感病癥狀。病原菌的致病性和無毒性取決于Avr蛋白的這種兩性分子(bi-functionaleffector)的特征。許多報(bào)道表明,抗性寄主利用R基因監(jiān)測TALE至少有3種策略(Schornacketal.,2013):(1)R基因編碼蛋白作為誘餌陷阱直接與TALE結(jié)合,寄主產(chǎn)生過敏反應(yīng),如AvrBs3與Bs3之間的識別;(2)突變TALE靶基因需要的通用轉(zhuǎn)錄因子,阻止轉(zhuǎn)錄,如水稻中含有xa5隱性基因的抗性機(jī)制(Schornacketal.,2006);(3)突變TALE靶基因的啟動(dòng)子區(qū)阻止TALE的結(jié)合;(4)監(jiān)控TALE基因啟動(dòng)子區(qū)模仿TALE靶基因的EBE序列,激活監(jiān)控基因,啟動(dòng)植物抗性。植物監(jiān)控病原菌的效應(yīng)物主要通過富含核苷酸結(jié)合位點(diǎn)的亮氨酸重復(fù)區(qū)(NBS-LRR)的蛋白來識別。然而對于TALE的識別機(jī)制較少,目前僅有關(guān)于番茄中的富含NBS-LRR的Bs4蛋白是通過該機(jī)制來識別AvrBs4。由于Bs4蛋白N端含有TIR結(jié)構(gòu)域,還能識別Hax3和Hax4這類的TALE(Kayetal.,2005)。Bs4蛋白識別的具體機(jī)制還不清楚,但有研究發(fā)現(xiàn),在植物體內(nèi)過量表達(dá)AvrBs3也能激發(fā)Bs4蛋白依賴的過敏反應(yīng)(Schornacketal.,2005)。另一個(gè)識別TALE的例子是水稻抗白葉枯病菌Xoo基因xa13,xa13編碼一個(gè)蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)家族蛋白(SWEET),其抗性表現(xiàn)在啟動(dòng)子區(qū)一個(gè)小區(qū)域的多態(tài)性,導(dǎo)致TALEPthXo1不能與其啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合,進(jìn)而影響水稻白葉枯病菌Xoo生長所需碳源(Chenetal.,2010)和銅的再分配(Yuanetal.,2010)。水稻Xa27編碼113個(gè)氨基酸的蛋白,啟動(dòng)子區(qū)有TALE結(jié)合位點(diǎn),賦予水稻對具有AvrXa27水稻白葉枯病菌Xoo及非維管束致病菌水稻細(xì)菌性條斑病菌Xanthomonasoryzaepv.oryzicola(Xoc)的抗性(Hummeletal.,2012)。最近有報(bào)道稱,Xoc中的TALEsTAL6和TAL11a可抑制水稻R基因Xa7對Xoo中TALEAvrXa7的識別,這是首次關(guān)于TALEs可作為植物防御反應(yīng)的抑制子,而缺失C端則無抑制作用,表明TAL6和TAL11a的轉(zhuǎn)錄激活寄主基因需要抑制作用(Jietal.,2014)。另一個(gè)TALE靶標(biāo)是植物轉(zhuǎn)錄因子。在Xcv85-10感染辣椒后研究依賴AvrBs3的轉(zhuǎn)錄譜時(shí)發(fā)現(xiàn)超過20個(gè)靶基因,命名為UPA(upregulatedbyAvrBs3)。upa20其編碼產(chǎn)物是一個(gè)bHLH(basichelix-loop-he-lix)家族的轉(zhuǎn)錄激活子,該轉(zhuǎn)錄激活子是AvrBs3誘導(dǎo)的植物細(xì)胞過度生長的關(guān)鍵調(diào)控蛋白。AvrBs3導(dǎo)致葉肉細(xì)胞的肥大,在感染后期階段也可能會(huì)支持細(xì)菌釋放到植物表面(Maroisetal.,2002;Kayetal.,2007)。在柑橘潰瘍病X.citri中也有類似報(bào)道,潰瘍是由幾個(gè)各異的XcTALEs誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子CsLOB1形成(Huetal.,2014)。Xoc中首次發(fā)現(xiàn)TALETal2g誘導(dǎo)寄主水稻中一個(gè)硫酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)子(Cernadasetal.,2014),硫酸鹽是否限制Xoc的生長或是其它機(jī)制仍不清楚。該研究還指出,Tal2g誘導(dǎo)多個(gè)寄主基因表達(dá),但是對病原菌致病關(guān)鍵的基因只有1個(gè)直接的S基因,其它被誘導(dǎo)的基因可能是附帶的效應(yīng)(Cer-nadasetal.,2014)。有趣的是,Xoo和Xoc中的TALEs寄主靶標(biāo)沒有重合的,Xoo中多個(gè)TALEs靶標(biāo)都是SWEET家族基因,而Xoc中26個(gè)TALEs沒有一個(gè)靶標(biāo)是SWEET家族基因(Cernadasetal.,2014)。
3.TAL在植物抗病上的生物工程應(yīng)用
鑒于以上的植物識別TALEs的機(jī)制,及TALE的生物學(xué)特性,科學(xué)家們開始設(shè)計(jì)新的植物抗性策略,從各方面擊破病原菌的攻擊,賦予植物新的抗性。TALE通過啟動(dòng)子模塊識別激活R或者S基因,啟動(dòng)下游基因,引起非寄主過敏反應(yīng)或促進(jìn)病原菌致病。啟動(dòng)子的模塊易于被基因工程所利用,目的在于使植物獲得新的抗性。
3.1改造抗性R基因監(jiān)控
TALEs富含亮氨酸重復(fù)區(qū)的抗性蛋白Bs4能識別多個(gè)TALEs,可以通過特異性高表達(dá)Bs4等抗性基因,增強(qiáng)植物的抗性。另外,研究表明體外突變抗性基因Rx的LRR區(qū),會(huì)增強(qiáng)植物對效應(yīng)物的識別特異性(FarnhamandBaulcombe,2006)。利用這一特性,基因工程改造Bs4基因LRR區(qū)可能增強(qiáng)其識別TALE的特異性和親和力。
3.2突變易感S基因的啟動(dòng)子區(qū)
TALEs通過RVDs識別特定的植物靶基因啟動(dòng)子區(qū),水稻抗性基因xa13,其對水稻白葉枯病菌Xoo的抗性表現(xiàn)在啟動(dòng)子區(qū)一個(gè)小區(qū)域的多態(tài)性,導(dǎo)致Xoo中TALEPthXo1不能與xa13啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合,進(jìn)而影響Xoo生長所需碳源(Chenetal.,2010)。利用基因工程將不敏感的基因xa13啟動(dòng)子區(qū)整合至易感S基因啟動(dòng)子區(qū),使植物獲得新抗性。這一方法在易感S基因Os11N3基因上應(yīng)用成功,獲得了水稻白葉枯病菌Xoo的抗性。另一個(gè)例子是,增加一個(gè)易感S基因的等位基因,這個(gè)等位基因的啟動(dòng)子區(qū)對于TALEs不敏感(Lietal.,2012)。這一方法需注意:植物中的靶基因無其它未知功能且沒有冗余的拷貝;啟動(dòng)子區(qū)的改變不能影響看家基因的功能;該靶基因?qū)Σ≡闹虏⌒灾陵P(guān)重要,最好能抗多個(gè)TALEs(Schornacketal.,2013)。S基因的激活對于促進(jìn)病原菌的致病至關(guān)重要,突變S基因的啟動(dòng)子區(qū)是對大多數(shù)的TALEs比較有效的方法。
3.3增加抗性基因啟動(dòng)子區(qū)
EBEs陷阱利用抗性基因xa27和Bs3的啟動(dòng)子區(qū)陷阱,即用生用工程的方法體外合成一個(gè)或者多個(gè)TALEs結(jié)合的EBEs位點(diǎn)至監(jiān)控基因的啟動(dòng)子區(qū),使得轉(zhuǎn)基因植物在病原菌感染過程中注入TALEs時(shí),迅速識別啟動(dòng)抗性反應(yīng)。這一方法成功的例子是在Bs3基因上,通過在啟動(dòng)子區(qū)增加2個(gè)EBEs位點(diǎn),一個(gè)是辣椒斑點(diǎn)病致病變種X.euvesicatoria中TALEAvrBs3Δrep16的RVDs部分突變識別區(qū)EBEs位點(diǎn),另一個(gè)是水稻白葉枯病菌Xoo中的TALEAvrX-a27的EBEs位點(diǎn)。結(jié)果表明,融合啟動(dòng)子區(qū)的Bs3表達(dá)構(gòu)建在煙草Nicotianabenthamiana上瞬時(shí)表達(dá)能夠增強(qiáng)寄主的識別能力(R觟meretal.,2009)。還有在啟動(dòng)子區(qū)增加6個(gè)EBEs的成功報(bào)道,通過在Xa27基因上分別增加3個(gè)水稻白葉枯病菌Xoo和3個(gè)水稻細(xì)條病致病變種X.oryzicola中的TALEs的EBEs,轉(zhuǎn)基因植株具有這2種病原細(xì)菌的抗性(Hummeletal.,2012)。
3.4篩選新的監(jiān)控基因
與已知的NBS-LRR抗性基因?qū)Ρ龋诓煌参镏写嬖谏锨€(gè)這樣的抗性監(jiān)控基因(Lietal.,2010)。利用深度測序RNA-Seq從辣椒Capsicumpubescens中鑒定并克隆TALEs激活的Bs4C的方法為鑒定更多新的監(jiān)控基因提供了基礎(chǔ)。對于某些情況下,需要減慢或加速過敏反應(yīng),可以從調(diào)整監(jiān)控基因的數(shù)量或者類型方面進(jìn)行生物工程改造(Strau覻etal.,2012;Schornacketal.,2013)。目前,有4個(gè)R基因被克隆:辣椒CapsicumannuumBs3(R觟meretal.,2007),辣椒C.pubescensBs4C(Strau覻etal.,2012),水稻OryzasativaXa10(Tianetal.,2014)和Xa27(Guetal.,2005)。篩選和克隆更多的植物NBS-LRR抗性基因,可以為生物工程改造提供更多的抗性資源。3.5生物工程改造獲得新抗性利用TALEs識別位點(diǎn)和限制性內(nèi)切酶融合表達(dá),定點(diǎn)改造基因組,將會(huì)是成本低廉、特異性識別更強(qiáng)的手段(Schornacketal.,2013)。植物的利用富含NBS-LRR的抗性R基因監(jiān)控病原菌的效應(yīng)物,監(jiān)控的有效應(yīng)性依賴于效應(yīng)物的保守性,對于病原菌越重要的效應(yīng)物,R基因的識別越容易因該效應(yīng)物的突變或丟失而失效,開發(fā)更多R基因?qū)τ谠鰪?qiáng)和持續(xù)的識別是關(guān)鍵。許多植物病毒是DNA單鏈病毒,極少數(shù)是雙鏈的。而單鏈病毒在復(fù)制增殖過程中形成DNA雙鏈,利用TALEs特異的DNA雙鏈識別特性,體外合成特異識別的模塊,可用來防治植物病毒病。植物-病原菌互作是一個(gè)持續(xù)的進(jìn)化過程,當(dāng)病原菌一方通過消除或改變特定的效應(yīng)物進(jìn)化避開寄主的監(jiān)控,意味著寄主的R基因系統(tǒng)被打敗。寄主通過R基因互補(bǔ)的改變等才能恢復(fù)其抗性。如馬鈴薯NBS-LRRR3a介導(dǎo)識別致病疫霉菌Phytophthorainfestans的AVR3a效應(yīng)物,AVR3a通過變異逃過R3a的識別(Vleeshouwersetal.,2011),而R3a被Se-gretin&Kamoun發(fā)現(xiàn)通過單個(gè)氨基酸的變異重新恢復(fù)識別變異的AVR3a(Schornacketal.,2013)。利用點(diǎn)突變的R基因獲得高抗性的寄主植物。
4.結(jié)論
積極實(shí)踐啟發(fā)式教學(xué),調(diào)動(dòng)學(xué)生思維活躍性
在前期精心設(shè)計(jì)教學(xué)內(nèi)容的基礎(chǔ)上,教學(xué)中我們對生物技術(shù)中基因工程、細(xì)胞工程、發(fā)酵工程、蛋白質(zhì)工程中的重點(diǎn)知識、原理和操作過程和日常生活中常見的事物聯(lián)系起來,并輔以形象的比喻。這樣做既能把復(fù)雜的操作步驟和枯燥、抽象的原理變得形象生動(dòng)易于學(xué)生理解和掌握,同時(shí)又能活躍課堂氛圍。例如,在生物遺傳物質(zhì)DNA重組過程中,DNA分子的切割與連接是最基本的操作,所有這些操作均由一系列功能各異的工具酶來完成。限制性核酸內(nèi)切酶能夠把大的長的雙鏈DNA分子切割成單個(gè)的基因片斷;而DNA連接酶能夠把DN斷重新連接在一起。課堂中我們非常形象地將限制性核酸內(nèi)切酶稱為“剪刀”,而把DNA連接酶比喻為“縫紉針線”,生物學(xué)科學(xué)家則是手藝高超的“時(shí)裝設(shè)計(jì)大師”,從而奉獻(xiàn)給世界一個(gè)又一個(gè)新的DNA分子。這樣就讓學(xué)生在輕松愉快的氛圍中理解和掌握了工具酶及其在基因操作中的重要作用。
巧用多媒體和視頻,豐富教學(xué)內(nèi)容
現(xiàn)代生物技術(shù)作為一門綜合性學(xué)科和前沿技術(shù),涵蓋內(nèi)容廣,新的生物技術(shù)層出不窮,新的科研成果不斷出現(xiàn)。在課堂教學(xué)中,除要適時(shí)選擇和引入精美的圖片外,還應(yīng)靈活運(yùn)用多媒體教學(xué)工具,對于一些較為抽象和難理解的教學(xué)內(nèi)容引入相關(guān)的FLASH動(dòng)畫和視頻來加強(qiáng)教學(xué)效果。例如,基因工程中利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)獲得目的基因時(shí),只有當(dāng)PCR反應(yīng)進(jìn)行到第三個(gè)循環(huán)時(shí)才能真正獲得第一個(gè)靶基因雙鏈DNA;該反應(yīng)還涉及聚合酶酶促作用、特異性引物引導(dǎo)以及其他多種反應(yīng)組成成分。課堂中單純用語言講解較復(fù)雜和困難,也很難讓學(xué)生徹底理解和掌握。針對這種情況,我們精心制作了相關(guān)內(nèi)容的FLASH,模擬生物體內(nèi)DNA復(fù)制過程,結(jié)合PCR反應(yīng)的三個(gè)典型步驟:高溫變性、低溫退火、適溫延伸,生動(dòng)地演示了脫氧核糖核苷酸按照堿基配對原則在引物引導(dǎo)下和DNA聚合酶酶促作用下以母鏈為模板延伸的過程。該FLASH內(nèi)容時(shí)長8分鐘,引物與模板鏈結(jié)合的位置、新鏈延伸的方向和終點(diǎn)等都得以清晰的說明,有效地闡明了PCR體外擴(kuò)增目的基因的基本原理以及各種組成成分在反應(yīng)中的作用。FLASH中動(dòng)畫形象生動(dòng)、簡潔精彩,極大的加強(qiáng)了教學(xué)效果。此外,在講到現(xiàn)代生物技術(shù)制藥發(fā)展方向和最新進(jìn)展時(shí),我們通過搜索現(xiàn)有教學(xué)資源,充分利用了近年國家“863”、“973”計(jì)劃項(xiàng)目成果展覽會(huì)等視頻資料,讓學(xué)生們在課堂上對我國生物技術(shù)領(lǐng)域前沿的專家學(xué)者們的研究課題及研究思路得以接觸和了解,從而搭起書本理論通向現(xiàn)實(shí)科研的橋梁。
發(fā)揮互動(dòng)式教學(xué)優(yōu)勢,倡導(dǎo)課堂討論,培養(yǎng)學(xué)生主動(dòng)獲取知識能力
在制藥工程專業(yè)生物技術(shù)教學(xué)過程中,我們主要采取了課堂提問、預(yù)留小問題、及課堂討論等多種互動(dòng)教學(xué)方式。其中,我們尤其注重在教學(xué)中組織和開展課堂討論。具體形式為在完成基因工程、細(xì)胞工程、發(fā)酵工程、蛋白質(zhì)/酶工程教學(xué)內(nèi)容后,把學(xué)生分成小組(每小組2-4人),各小組自主選擇主題,利用課外時(shí)間到圖書館查閱生物技術(shù)制藥方面的專業(yè)著作,或利用網(wǎng)絡(luò)資源查閱學(xué)術(shù)期刊。在此基礎(chǔ)上經(jīng)小組內(nèi)部討論分析后,整理撰寫成課堂討論書面作業(yè)和制作成多媒體(PPT)課件,并且在課堂上要面向全班同學(xué)和老師進(jìn)行匯報(bào)和講解,匯報(bào)時(shí)間8-10分鐘,之后還有3-5分鐘的討論和質(zhì)疑階段。為了有效開展課堂討論,通常我們會(huì)提前1-2周把課堂討論活動(dòng)布置和安排下去,以留給學(xué)生們充足的時(shí)間去查閱資料和準(zhǔn)備作業(yè)。在此期間任課教師會(huì)對各小組準(zhǔn)備中遇到的各類具體問題進(jìn)行解疑,還會(huì)專門在課堂討論進(jìn)行前的2-3天,逐一檢查各個(gè)小組的多媒體制作和完成情況,并就其PPT中存在的問題和不足給予指導(dǎo)和修改。在上述教學(xué)活動(dòng)中,雖然任課教師未親自講課,但為了充分利用好課堂討論這個(gè)教學(xué)環(huán)節(jié),不能讓其流于形式,任課教師往往要付出很大的心血和時(shí)間去組織和協(xié)助學(xué)生。正所謂“功夫不負(fù)有心人”,近幾屆的教學(xué)實(shí)踐表明:這種教學(xué)方式一方面能夠有效地提高學(xué)生參與教學(xué)的積極性,極大地激發(fā)學(xué)生對生物技術(shù)的好奇心和求知欲;同時(shí),通過課外查閱文獻(xiàn)資料、小組討論、分析問題、整理報(bào)告一系列過程也切實(shí)培養(yǎng)了學(xué)生積極思考、自己動(dòng)手、歸納問題、總結(jié)問題、主動(dòng)獲取知識的系統(tǒng)能力。教學(xué)中課堂氣氛活躍,學(xué)生的自學(xué)能力、獨(dú)立思考問題能力、演講口才和反應(yīng)能力等方面均得到了鍛煉和提高,因此在教學(xué)中適時(shí)采用課堂討論的教學(xué)方式值得繼續(xù)加強(qiáng)!
結(jié)合實(shí)踐、強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)教學(xué)
實(shí)驗(yàn)部分教學(xué)是該門課程體系的重要組成部分,是對理論教學(xué)的重要補(bǔ)充。在課堂理論教學(xué)的基礎(chǔ)上,實(shí)驗(yàn)教學(xué)中主要通過強(qiáng)化基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)部分和選擇綜合設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),來培養(yǎng)學(xué)生動(dòng)手能力、實(shí)踐能力和創(chuàng)新能力。實(shí)驗(yàn)教學(xué)在促進(jìn)和加強(qiáng)學(xué)生對理論教學(xué)中的重要原理、方法的理解和掌握方面有著重要作用,但實(shí)驗(yàn)室內(nèi)完成的多是驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn),要讓教學(xué)和生物制藥實(shí)際相結(jié)合,還應(yīng)該讓學(xué)生走出實(shí)驗(yàn)室、走出校門,到生物制藥企業(yè)中去親自感受和了解生物技術(shù)制藥的發(fā)展現(xiàn)狀。因此,在完成實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)教學(xué)之外,結(jié)合制藥工程專業(yè)總體實(shí)踐環(huán)節(jié),學(xué)院通過多方溝通和聯(lián)系,與渭南美邦生物制藥、綠盾生物制藥等幾家公司建立了良好的教學(xué)合作關(guān)系,讓學(xué)生深入廠區(qū)和生產(chǎn)車間去參觀和學(xué)習(xí)。教學(xué)實(shí)踐表明:實(shí)驗(yàn)室內(nèi)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)和校外參觀相結(jié)合的教學(xué)方式,既能培養(yǎng)學(xué)生扎實(shí)的基本生物技術(shù)操作技能,同時(shí)又讓學(xué)生充分了解了當(dāng)前社會(huì)生物制藥企業(yè)的規(guī)模化生產(chǎn)模式,這對于開闊學(xué)生的視野,學(xué)生畢業(yè)后的就業(yè)選擇都有極大幫助。
建立有效反饋機(jī)制、保障暢通的信息溝通渠道
上述,我們從教學(xué)內(nèi)容和教學(xué)方式上進(jìn)行了探索和改革,并身體力行。但學(xué)生對具體教學(xué)效果的反響如何,教師真正理解學(xué)生期望的教學(xué)方式嗎?理解是提高教育質(zhì)量的有效途徑[3]。在實(shí)際教學(xué)過程中,許多教師往往因?yàn)榻虒W(xué)任務(wù)重、課時(shí)有限,僅限于努力提高自己教學(xué)效果,而無意中忽略了去征求或收集學(xué)生對這門課的建議和意見。這就不利于授課教師在長期教學(xué)生涯中切實(shí)有效地改進(jìn)和提高教學(xué)效果。我們在教學(xué)過程中,嘗試并建立了以下溝通渠道:①教學(xué)伊始就將授課教師的具體聯(lián)系方式(包括電子郵箱信息)提供給全班同學(xué),鼓勵(lì)大家在課內(nèi)或課外就遇到的問題和老師積極溝通和交流;②每一大節(jié)課第二小節(jié)課的最后5-10分鐘留給學(xué)生,便于部分學(xué)生就某具體問題和老師進(jìn)行交流和討論;③完成全書主要章節(jié)教學(xué)內(nèi)容一半及授課即將結(jié)束時(shí),由學(xué)生以匿名的形式對教學(xué)環(huán)節(jié)中不足之處或值得發(fā)揚(yáng)的地方寫出書面意見和建議,由班干部于課后統(tǒng)一收齊后交給任課老師,便于教師進(jìn)一步改進(jìn)該門課程的教學(xué)。通過以上教學(xué)實(shí)踐表明:學(xué)生在教學(xué)中的主體地位和意識得到明顯加強(qiáng),學(xué)生感覺到自己的意見和建議得到及時(shí)響應(yīng),因而參與教學(xué)的積極性也大大加強(qiáng)。由于及時(shí)采納了學(xué)生的建議,老師和同學(xué)建立了良好的互信關(guān)系,該門課程也取得了良好的教學(xué)效果,同時(shí)還提升了學(xué)生對制藥工程專業(yè)整體的滿意度。
組織學(xué)生討論交流不失為一種應(yīng)對生成性問題的好方法。針對學(xué)生提出的生成性問題,教師加以重視,引導(dǎo)學(xué)生以小組合作形式探討這一問題,能將生物課堂教學(xué)再次點(diǎn)燃。而對于提出問題的學(xué)生,其內(nèi)心也得到滿足。學(xué)生在討論中,學(xué)會(huì)思考、分析,尋求問題答案。而如果教師直接給出問題答案,學(xué)生提出的生成性問題則顯得意義不大。例如:在學(xué)習(xí)初中生物《人的生殖》這一課時(shí),以組織討論的形式,應(yīng)對生成性問題,將生物課堂點(diǎn)燃。本課學(xué)習(xí)的內(nèi)容主要是男性和女性生殖系統(tǒng)的主要器官,以及人的生殖過程。學(xué)生了解了受精卵的發(fā)育過程主要是:受精卵———胚泡———胚胎———胎兒。此時(shí),有一個(gè)學(xué)生提出這樣的問題:正常的女性都有兩個(gè)卵巢。如果一個(gè)卵巢摘除了,這位女性還能不能生育?此時(shí),教師靈機(jī)一動(dòng),智慧理答,組織討論交流:這個(gè)問題問得非常好,但是老師想傾聽你們的想法。教師引導(dǎo)學(xué)生以小組合作形式進(jìn)行討論。在學(xué)生討論過程中,教師不時(shí)參與小組,一起與學(xué)生進(jìn)行交流分析。有小組學(xué)生認(rèn)為摘除一個(gè)卵巢是可以生育的,前提是另一個(gè)卵巢功能良好;有小組學(xué)生認(rèn)為摘除一個(gè)卵巢會(huì)對生育影響很大,也有可能造成不孕等。師:大家再想想為什么有些女性要摘除卵巢?是什么問題?摘除卵巢對女性還會(huì)有什么影響?教師提出的問題是基于學(xué)生提出的問題之上的,主要是為了拓寬學(xué)生視野,將課堂推向。在這個(gè)案例中,教師巧用討論法,變生成性問題為有效教學(xué)資源;再結(jié)合學(xué)生的問題,提出新的問題,引導(dǎo)學(xué)生討論,取得很好的效果。
二、動(dòng)手實(shí)驗(yàn),享受動(dòng)手實(shí)驗(yàn)探究樂趣
生物學(xué)科離不了實(shí)驗(yàn)。在需要實(shí)驗(yàn)探究的課堂上,教師可以引導(dǎo)學(xué)生動(dòng)手實(shí)驗(yàn),應(yīng)對生成性問題。在實(shí)驗(yàn)中,學(xué)生可以享受動(dòng)手實(shí)驗(yàn)探究的樂趣,也能借助實(shí)驗(yàn),解決心中疑惑。例如:在學(xué)習(xí)初中七年級生物《單細(xì)胞的生物體》這一課時(shí),引導(dǎo)學(xué)生分組動(dòng)手實(shí)驗(yàn)探究,成功將生成性問題變?yōu)榻虒W(xué)資源。在講到“生物能對外界的刺激做出相應(yīng)的反應(yīng)”這一知識點(diǎn)時(shí),有學(xué)生提問:草履蟲,一個(gè)細(xì)胞構(gòu)成的生物,是否也能對外界的刺激做出相應(yīng)的反應(yīng)?此時(shí),教師引導(dǎo):假設(shè)能,你能用實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證嗎?在教師的號召下,學(xué)生開始分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn),動(dòng)手探究。教師給學(xué)生選擇的刺激物是:肉汁、食鹽。學(xué)生分組討論如何設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),四人一組,兩人利用肉汁實(shí)驗(yàn),兩人利用食鹽實(shí)驗(yàn),根據(jù)實(shí)驗(yàn)得出結(jié)果。最后,學(xué)生總結(jié):單細(xì)胞生物也能趨利避害。在這個(gè)案例中,針對學(xué)生提出的生成性問題,教師并沒有盲目回答“能還是不能”,因?yàn)檫@樣只能讓問題喪失原有的利用價(jià)值。反之,教師引導(dǎo)學(xué)生以自主實(shí)驗(yàn)的方式探究出答案,學(xué)生既能享受動(dòng)手樂趣,又使實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Φ玫教岣?,分析出答案。因此,以?shí)驗(yàn)形式應(yīng)對生成性問題,能夠有效將其轉(zhuǎn)換為有效的教學(xué)資源。
1.指導(dǎo)教師監(jiān)控機(jī)制
學(xué)生能否按規(guī)定的要求,保質(zhì)保量地完成畢業(yè)論文任務(wù),指導(dǎo)教師起到核心監(jiān)控作用。教師的知識結(jié)構(gòu)、學(xué)術(shù)水平、教學(xué)經(jīng)驗(yàn)、工作作風(fēng)、工作責(zé)任心等,都對畢業(yè)論文指導(dǎo)效果發(fā)揮影響。指導(dǎo)教師應(yīng)有曾經(jīng)獨(dú)立指導(dǎo)或協(xié)助指導(dǎo)過畢業(yè)論文工作經(jīng)驗(yàn),在以往指導(dǎo)畢業(yè)論文過程中認(rèn)真負(fù)責(zé)、學(xué)生反映良好、畢業(yè)設(shè)計(jì)完成較好。生物工程專業(yè)屬于理工科,除了有良好態(tài)度外,還要求指導(dǎo)教師有較高的科研素養(yǎng)。
2.選題監(jiān)控機(jī)制
為了較好地開展畢業(yè)論文選題工作,在第七學(xué)期教師應(yīng)該下達(dá)關(guān)于畢業(yè)論文選題的工作。學(xué)生可以結(jié)合教師的科研選題,學(xué)生確定后,指導(dǎo)教師介紹課題的基本要求,并提供一部分資料。學(xué)生自行選題,學(xué)生根據(jù)實(shí)際工作或者實(shí)習(xí)情況,對未來所從事的工作有明確想法,對未來工作有應(yīng)用價(jià)值,可以進(jìn)行這個(gè)方面的研究選擇,但指導(dǎo)教師必須嚴(yán)格控制,學(xué)生必須寫出提綱和內(nèi)容摘要,明確研究目的方向。生物工程專業(yè)畢業(yè)生選題來源也無非這幾個(gè)方向,對于重實(shí)驗(yàn)、重?cái)?shù)據(jù)的專業(yè)來說,更是需要在選題的時(shí)候把控好方向。
3.開題監(jiān)控機(jī)制
開題環(huán)節(jié)是做好畢業(yè)論文工作重要部分,督促學(xué)生完成好開題報(bào)告能夠控制意外的發(fā)生。課題內(nèi)容是否適合學(xué)生的能力,能夠在規(guī)定時(shí)間完成,選題是否存在過大或者過窄,是否需要更換題目,通過審查開題報(bào)告內(nèi)容發(fā)現(xiàn)研究路徑和方法是否合理。論文結(jié)構(gòu)是否恰當(dāng)。這個(gè)環(huán)節(jié)做充足,能夠減少重大失誤,提醒學(xué)生在研究課題過程中應(yīng)注意的問題和環(huán)節(jié),對研究困難有一定預(yù)見性。生物工程的畢業(yè)生更是應(yīng)該在這個(gè)環(huán)節(jié)做充分準(zhǔn)備。
二、生物工程專業(yè)論文中期質(zhì)量監(jiān)控
重點(diǎn)監(jiān)控畢業(yè)生參加畢業(yè)論文的態(tài)度、自覺性,時(shí)間與精力是否有保證等。由指導(dǎo)教師組織、安排,要求畢業(yè)學(xué)生匯報(bào)課題進(jìn)展情況,回答指導(dǎo)教師提出的問題,對畢業(yè)論文中存在態(tài)度問題的學(xué)生及時(shí)進(jìn)行批評、警告,及時(shí)指明努力方向,采取補(bǔ)救措施。任何專業(yè)都需要強(qiáng)調(diào)畢業(yè)生個(gè)體的努力,對于畢業(yè)生的學(xué)習(xí)風(fēng)氣應(yīng)該常抓不懈。
三、畢業(yè)論文后期質(zhì)量監(jiān)控階段
1.論文答辯前監(jiān)控
院系檢查學(xué)生是否按畢業(yè)論文要求完成所有工作,對學(xué)生成果驗(yàn)收和答辯資格審查,確定學(xué)生答辯資格。畢業(yè)論文成績一般采用五級計(jì)分制:優(yōu)秀、良好、中等、及格、不及格。指導(dǎo)教師、評閱教師對學(xué)生的論文進(jìn)行評定。指導(dǎo)教師主要關(guān)注選題意義、材料選擇及組織能力、結(jié)構(gòu)框架、基礎(chǔ)理論的運(yùn)用及分析能力、論文的學(xué)術(shù)水平等;評閱教師主要關(guān)注選題意義、論文難度、結(jié)構(gòu)、資料使用、論述、運(yùn)用能力等方面,只有指導(dǎo)教師和評閱教師給出的成績達(dá)到及格,才能進(jìn)行答辯。
2.論文答辯過程監(jiān)控機(jī)制
要徹底解決五年制師范生在行為規(guī)范方面的問題,必須以教育生態(tài)學(xué)理論為指導(dǎo),改變傳統(tǒng)德育教育觀念,營造有利于學(xué)生行為規(guī)范養(yǎng)成的教育氛圍,形成師范學(xué)校良好的德育環(huán)境生態(tài)系統(tǒng)。
(一)堅(jiān)持以人為本思想,實(shí)現(xiàn)“外行內(nèi)化”
教育是培養(yǎng)人的事業(yè),教育的根本在于“成人”。教育過程中,應(yīng)本著以人為本的原則,采取有效的德育教育手段,從提高師范生的人文素養(yǎng)入手,讓學(xué)生把養(yǎng)成良好的行為習(xí)慣和道德素養(yǎng)當(dāng)做內(nèi)在需要,從而自愿改變、糾正自身行為規(guī)范方面的諸多不足,使學(xué)生以更高標(biāo)準(zhǔn)和要求主動(dòng)、自覺地踐行學(xué)生守則和行為規(guī)范,實(shí)現(xiàn)“內(nèi)化”。要實(shí)現(xiàn)“內(nèi)化”,必須做好以下幾點(diǎn):
1.注重學(xué)生個(gè)體需要的針對性。在確立德育教育內(nèi)容和方法時(shí),要分析五年制師范生的主體需要,了解他們的個(gè)性差異,分析他們在專業(yè)知識素養(yǎng)和行為活動(dòng)方面的向往和追求,做到因材施教、因人施教,使學(xué)生產(chǎn)生情感共鳴。通過發(fā)揮學(xué)校、班主任和全體教師的主導(dǎo)作用,激發(fā)學(xué)生的主體意識,讓學(xué)生自主學(xué)習(xí)、自主發(fā)展,充分發(fā)揮其主動(dòng)性、能動(dòng)性、積極性和創(chuàng)造性,這是實(shí)現(xiàn)外行內(nèi)化的情感基礎(chǔ)。
2.注重人文素質(zhì)教育的精神性。有效開展人文素質(zhì)教育,并將其貫穿學(xué)校的各項(xiàng)教育活動(dòng)和各門學(xué)科教學(xué)實(shí)踐,不斷將人類優(yōu)秀的文化成果內(nèi)化為學(xué)生相對穩(wěn)定的內(nèi)在品質(zhì),使人文素養(yǎng)在學(xué)生身上形成強(qiáng)大的人文精神,是提高師范生文明行為和道德素養(yǎng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
3.注重德育教育活動(dòng)的實(shí)效性。在具體德育教育活動(dòng)中,應(yīng)針對學(xué)生的個(gè)體差異,培養(yǎng)學(xué)生對真善美的內(nèi)在需要,只有讓學(xué)生將認(rèn)知和踐行結(jié)合在一起,才能真正取得德育教育的內(nèi)化效果。
4.注重德育教育手段的多樣性。在德育教育實(shí)踐中,要注意運(yùn)用情境創(chuàng)設(shè),通過音樂、美術(shù)、故事、電影、電視、多媒體等手段,給學(xué)生身臨其境的感覺,引導(dǎo)學(xué)生積極參與德育教育學(xué)習(xí),豐富學(xué)生的感覺活動(dòng),提高學(xué)生對自身行為的判斷力,讓學(xué)生學(xué)會(huì)調(diào)整自身言行,學(xué)會(huì)自律,自覺養(yǎng)成良好的行為規(guī)范。
(二)開展社會(huì)實(shí)踐活動(dòng),實(shí)現(xiàn)“知行合一”
高師德育除了營造良好的育人氛圍外,還要發(fā)揮社會(huì)環(huán)境對學(xué)生行為規(guī)范和道德養(yǎng)成的作用,提高德育工作實(shí)效。1.組織學(xué)生參加各種社會(huì)實(shí)踐活動(dòng),促進(jìn)良好行為習(xí)慣的養(yǎng)成。要充分發(fā)揮學(xué)生會(huì)、團(tuán)組織、學(xué)生社團(tuán)的自我教育、自我管理、自我服務(wù)的功能和作用,充分發(fā)揮學(xué)生黨團(tuán)員、學(xué)生干部的骨干和模范帶頭作用。經(jīng)常組織寓教于樂的各種社會(huì)實(shí)踐活動(dòng),讓學(xué)生接觸社會(huì)、了解國情、陶冶情操,注重引導(dǎo)學(xué)生在實(shí)踐中了解社會(huì)、明辨是非、增強(qiáng)社會(huì)責(zé)任感、激感,使他們通過實(shí)踐不斷完善自己的言行,升華思想,養(yǎng)成良好的行為規(guī)范,促進(jìn)學(xué)生德、智、體、美全面發(fā)展。2.組織學(xué)生參加見習(xí)和實(shí)習(xí)實(shí)踐活動(dòng)。見習(xí)和實(shí)習(xí)作為學(xué)生直接體驗(yàn)教師職業(yè)道德的教育教學(xué)實(shí)踐活動(dòng),不但能夠使師范生認(rèn)識社會(huì),還能通過教育教學(xué)實(shí)踐,在課堂上感受教師職業(yè)道德,加深其對教師職業(yè)技能及教師職業(yè)行為規(guī)范和職業(yè)道德的理解,實(shí)現(xiàn)師范生的道德內(nèi)化,實(shí)現(xiàn)從他律向自律的完美轉(zhuǎn)化。
(三)營造優(yōu)美校園環(huán)境,實(shí)現(xiàn)環(huán)境育人
校園無小事,處處皆育人,教師無小節(jié),事事是楷模,這句話實(shí)質(zhì)上涵蓋深刻的生態(tài)思想。校園中的各種生態(tài)因子,無論是作為教育者的人還是靜態(tài)的校園環(huán)境,都對學(xué)生的行為規(guī)范、道德素養(yǎng)養(yǎng)成起到積極的促進(jìn)作用。
1.加強(qiáng)教師的人文素養(yǎng)培養(yǎng)。教師的人文素養(yǎng)是教師具有的人文精神及在教師日常活動(dòng)中體現(xiàn)出來的思想、道德、情感、心理、性格、思維模式等方面的氣質(zhì)和修養(yǎng)。在德育“內(nèi)化”教育過程中,教師更應(yīng)運(yùn)用自己的師表風(fēng)范和人格魅力教育和影響學(xué)生。教師應(yīng)不斷學(xué)習(xí)、不斷完善、提高修養(yǎng),在教育工作中確立以人為本的創(chuàng)新意識、創(chuàng)新精神和大愛情感,有的放矢地開展學(xué)生德育養(yǎng)成教育,使學(xué)生見賢思齊。只有如此,才能真正達(dá)到學(xué)?!敖逃?、管理育人、服務(wù)育人”的目的。
2.開展豐富多彩的第二課堂活動(dòng)。要充分發(fā)揮第二課堂的重要作用,引導(dǎo)學(xué)生在特定校園環(huán)境中接受審美和藝術(shù)教育,營造與社會(huì)和時(shí)代密切相關(guān)并具有師范校園特色的人文氛圍、校園精神和校園文化。通過寓教于樂的活動(dòng)在潛移默化中對學(xué)生進(jìn)行理想信念、愛國主義和道德品質(zhì)教育。此外,還可以通過開展心理咨詢、綠色網(wǎng)絡(luò)教育、社會(huì)調(diào)查、加強(qiáng)職業(yè)理想教育和專業(yè)學(xué)習(xí)指導(dǎo)與就業(yè)指導(dǎo)等活動(dòng),加強(qiáng)學(xué)生思想教育,發(fā)揮其在校園育人環(huán)境中的重要作用。
3.發(fā)揮宣傳陣地的作用。利用學(xué)校的廣播、報(bào)紙、電視臺(tái)、宣傳櫥窗、校園網(wǎng)等宣傳陣地,大力開展教師職業(yè)道德宣傳教育,宣傳優(yōu)秀的道德文化,形成積極向上、富有師范氣息的輿論導(dǎo)向,從而使學(xué)生對教師的職業(yè)精神有極高的認(rèn)知;還要充分發(fā)揮圖書館、實(shí)驗(yàn)室和各種場館設(shè)施的作用,構(gòu)建全方位、立體化的校園育人環(huán)境,使學(xué)生的校園文化生活永遠(yuǎn)積極、健康、向上。
4.打造積極向上的兩室文化。切實(shí)做到“讓每一面墻壁說話,讓每一寸土地都有教育意義”,讓高雅清潔的環(huán)境使學(xué)生如入芝蘭之室,促進(jìn)其高尚品格的形成。以優(yōu)秀的教室文化和宿舍文化為載體,大力開展文明班級、文明宿舍創(chuàng)建活動(dòng),把優(yōu)秀、積極的人文文化和教師職業(yè)道德融入日?;顒?dòng)中。通過創(chuàng)建活動(dòng),每一個(gè)學(xué)生的理想信念、價(jià)值取向、生活觀念、道德水準(zhǔn)、人際關(guān)系等都上新的臺(tái)階,學(xué)生的行為規(guī)范更符合師范生的標(biāo)準(zhǔn)。
(四)重視家庭、學(xué)校、社會(huì)聯(lián)手,實(shí)現(xiàn)合力育人
依據(jù)教育生態(tài)學(xué)的觀點(diǎn),學(xué)校要高度重視學(xué)校、家庭、社會(huì)“三位一體”合力育人機(jī)制,使處于高師德育生態(tài)系統(tǒng)中的各要素都發(fā)揮其作用,提高學(xué)生的行為規(guī)范水平和道德素養(yǎng)。在德育教育過程中,學(xué)校要建立家長檔案,學(xué)校德育教育部門要經(jīng)常與家長聯(lián)系,針對不同家庭、不同家長特點(diǎn),宣傳和諧、健康、民主、溫馨的家庭環(huán)境對學(xué)生身心發(fā)展的重要意義,使家長樹立正確的育人理念,促進(jìn)學(xué)生養(yǎng)成良好的行為習(xí)慣和道德素養(yǎng)。學(xué)校還要盡量為學(xué)生健康成長營造良好的成長環(huán)境,通過社會(huì)實(shí)踐活動(dòng),學(xué)生接觸中華民族的優(yōu)秀歷史文化,通過見習(xí)、實(shí)習(xí)活動(dòng)養(yǎng)成遵守職業(yè)道德和社會(huì)公德的良好習(xí)慣。
(五)加強(qiáng)德育體系建設(shè),實(shí)現(xiàn)制度育人
實(shí)現(xiàn)德育教育的“外行內(nèi)化、知行合一”,是師范學(xué)校德育教育追求的最高目標(biāo)。為了保證這個(gè)目標(biāo)實(shí)現(xiàn),還要輔以嚴(yán)格的制度管理,完善學(xué)生德育操行考核評價(jià)體系,而這些制度和評價(jià)體系必須是建立在以人為本、以學(xué)生為主體的基礎(chǔ)之上的,只有當(dāng)學(xué)生充分認(rèn)識到制度對自身行為規(guī)范養(yǎng)成起到的外在約束作用及發(fā)自內(nèi)心地、自覺地將操行考核視作行為規(guī)范的內(nèi)化要求時(shí),學(xué)生行為才會(huì)真正規(guī)范。
二、結(jié)語