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第1篇

論文摘要目的：探討糖尿病足中醫(yī)辨證分型與血管細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原的表達(dá)差異。方法：對(duì)32例截肢的糖尿病足患者按中醫(yī)辨證分為氣血兩虛瘀阻證、脈絡(luò)瘀熱證、脈絡(luò)熱毒證和氣陰兩虛瘀阻證，分別對(duì)其截肢肢體的脛后動(dòng)脈應(yīng)用免疫組化法對(duì)細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原（Ki67）的表達(dá)進(jìn)行觀察、分析。結(jié)果：Ki67的陽性表達(dá)與糖尿病足動(dòng)脈硬化閉塞程度呈負(fù)相關(guān)，與血管炎癥病變程度呈正相關(guān)。結(jié)論：炎癥在糖尿癥的大血管病變的過程中起到了重要的作用。

糠尿病足是糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥，據(jù)統(tǒng)計(jì)1996年全球糖尿病患者1．2億，預(yù)計(jì)到2025年，將達(dá)到2．5億以上，而大約15％的糖尿病患者將在其生活的某一時(shí)間發(fā)生足潰瘍或壞疽[1]。目前對(duì)于糖尿病足病因及發(fā)病機(jī)制雖然還不是完全清楚，但大家公認(rèn)糖尿病合并大血管病變導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化是糖尿病足發(fā)病的最主要因素?，F(xiàn)將2004年10月～2005年5月間我們收治的32例糖尿病足患者的截肢動(dòng)脈標(biāo)本的血管細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原(Ki67)與其中醫(yī)辨證分型的相關(guān)性研究情況報(bào)告如下。

1臨床資料

1．1一般資料：32例均為天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院和天津中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院2004年10月～2005年5月間的住院患者，其中男性24例，女性8例；年齡50～86歲，平均年齡69．2歲；糖尿病病程最長30年，最短6年，平均18±2．4年。

1．2診斷標(biāo)準(zhǔn)：糖尿病足的診斷標(biāo)準(zhǔn)采用2000年中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)會(huì)第二屆糖尿病足會(huì)議所制訂的“糖尿病足(肢端壞疽)檢查方法及診斷標(biāo)準(zhǔn)”。

1．3截肢標(biāo)準(zhǔn)：參照國際糖尿病足工作組編寫的《糖尿病足國際共識(shí)》中關(guān)于“大截肢的定義、標(biāo)準(zhǔn)和指標(biāo)”[2]執(zhí)行。

1．4中醫(yī)辨證分型標(biāo)準(zhǔn)：參照《中醫(yī)外科學(xué)(第七版)》及《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則·脫疽》之中醫(yī)辨證分型方案分為氣陰兩虛瘀阻證、脈絡(luò)瘀熱證、氣血兩虛瘀阻證、脈絡(luò)熱毒證四型。

2觀察方法

2．1標(biāo)本取材：壞疽截肢標(biāo)本32例，其中按中醫(yī)辨證分型氣血兩虛瘀阻組10例，脈絡(luò)瘀熱組10例，氣陰兩虛瘀阻組4例，脈絡(luò)熱毒組8例，取各例標(biāo)本下肢脛后動(dòng)脈。標(biāo)本經(jīng)過10％福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，備用。

2．2設(shè)備、試劑：美國PENGUIN-600CL自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)，細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原(Ki67)抗體PV9000試劑盒DAB購于北京中山生物技術(shù)有限公司。

2．3免疫組織化學(xué)法：標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，采用PV法進(jìn)行免疫組化染色，染色過程嚴(yán)格按試劑盒染色程序進(jìn)行，選取已知的陽性切片作陽性對(duì)照，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。觀察細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原(Ki67)，陽性物質(zhì)呈棕黃色細(xì)顆粒狀于細(xì)胞核表達(dá)，采用美國PENGUIN-600CL圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像分析，選取病變處每500個(gè)細(xì)胞Ki67的陽性表達(dá)率作為其陽性表達(dá)指數(shù)。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS10．0軟件包進(jìn)行方差分析。

3結(jié)果

3．1中醫(yī)各證型所占比例以及年齡、性別分布：各證型比例，氣血兩虛瘀阻組10例（31．25%），脈絡(luò)瘀熱組10

例（31．25%），氣陰兩虛瘀阻組4例（12．5%），脈絡(luò)熱毒組8例（25．0%）。年齡、性別分布情況，見表1。

表132例患者年齡、性別分布n（%）

性別n50~60歲61~70歲71~80歲80歲以上男24（75．0）4（12．5）8（25．0）11（34．4）1（3．1）女8（25．0）1（3．1）3（9．3）4（12．5）0總計(jì)32（100．0）5（15．6）11（34．4）15（46．9）1（3．1）3．2免疫組織化學(xué)法觀察各證型Ki67表達(dá)差異：具體情況見表2。

表2各證型Ki67陽性表達(dá)指數(shù)比較（%）

證型Ki67陽性表達(dá)指數(shù)脈絡(luò)熱毒4．87±1．01*氣陰兩虛瘀阻1．86±0．47脈絡(luò)瘀熱1．49±0．13氣血兩虛瘀阻0．30±0．18注：與氣血兩虛瘀阻型比較，*P<0．05。

氣血兩虛瘀阻證、脈絡(luò)熱毒證、脈絡(luò)瘀熱證、氣陰兩虛瘀阻證中均可見部分細(xì)胞Ki67呈陽性表達(dá)，在脈絡(luò)熱毒證中表達(dá)指數(shù)最高，氣血兩虛瘀阻證中表達(dá)指數(shù)最低，二者比較具有顯著性差異(P<0．05)。

4討論

Ki67抗原為細(xì)胞核內(nèi)與細(xì)胞分裂增殖相關(guān)的蛋白抗原，分子量為345kd和395kd，其編碼基因位于第10號(hào)染色體上。Ki67的表達(dá)出現(xiàn)于G1中期到晚期，S期和G2期逐漸增加，有絲分裂期達(dá)高峰，分裂后迅速降解或丟失抗原決定簇，到G0期則不表達(dá)，半衰期為lh或更短[3]。有人認(rèn)為它可能是具有蛋白結(jié)合特性的重要結(jié)構(gòu)，在有絲分裂中起著維持DNA規(guī)則結(jié)構(gòu)的重要作用[4]，是一個(gè)反映細(xì)胞增殖的敏感指標(biāo)。

在糖尿病足的不同辨證分型中氣血兩虛瘀阻證、脈絡(luò)熱毒證、脈絡(luò)瘀熱證、氣陰兩虛瘀阻證中Ki67表達(dá)均呈陽性，在脈絡(luò)熱毒證中表達(dá)最強(qiáng)、氣血兩虛瘀阻證中表達(dá)最弱，二者相比具有顯著性差異(P＜0．05)。根據(jù)Ki67陽性指數(shù)可以判斷細(xì)胞增殖的活性，指明細(xì)胞增殖與糖尿病足動(dòng)脈病變的關(guān)系。在糖尿病足的不同辨證分型中動(dòng)脈的硬化閉塞程度由輕到重依次是脈絡(luò)熱毒證、氣陰兩虛瘀阻證、脈絡(luò)瘀熱證、氣血兩虛瘀阻證。Ki67的陽性表達(dá)與糖尿病足動(dòng)脈硬化閉塞程度呈負(fù)相關(guān)。而在通過對(duì)32例糖尿病足截肢的動(dòng)脈進(jìn)行病理學(xué)觀察的過程中發(fā)現(xiàn)糖尿病足血管病變主要體現(xiàn)在中動(dòng)脈的病理學(xué)變化，其中脈絡(luò)熱毒、氣陰兩虛瘀阻兩證型以動(dòng)脈周圍及全層的炎癥性改變?yōu)橹?；脈絡(luò)瘀熱、氣血兩虛瘀阻證以中膜鈣化、平滑肌細(xì)胞萎縮、變性、壞死及膠原纖維增多及內(nèi)膜粥樣斑塊形成為主，炎癥表現(xiàn)不明顯；而Ki67的陽性指數(shù)與血管炎癥病變程度呈正相關(guān)。這說明炎癥在糖尿病的大血管病變的過程中起了重要的作用，特別是在脈絡(luò)熱毒證、氣陰兩虛瘀阻證兩型，這對(duì)臨床具有重要的指導(dǎo)意義。

5參考文獻(xiàn)

1BoultonAJ.Thediabeticfoot：aglobalview.DiabetelMetabResRev，2000，16(1)：2．

2許樟榮，敬華．糖尿病足國際共識(shí)．中華糖尿病學(xué)會(huì)第二屆足病第一次足病研討會(huì)．2002，435．

第2篇

【關(guān)鍵詞】骨髓內(nèi)皮細(xì)胞GMCSF細(xì)胞增殖

EffectsofGranulocyteMacrophageColonyStimulatingFactoronGrowthofMurineBoneMarrowEndothelialCells

AbstractThepurposeofthisstudywastoinvestigatetheeffectsofgranulocytemacrophagecolonystimulatingfactor(GMCSF)onthegrowthofmousebonemarrowendothelialcells.Endothelialcellculturemedium（EndoM）wasusedtoculturemurinebonemarrowendothelialcells.EndothelialcellcolonieswerecountedundermicroscopebyWrightGiemsastaining.TheeffectofdifferentconcentriationofGMCSFontheproliferationofbonemarrowendothelialcellswasobservedbytheformationofendothelialcellcolonies,MTTandflowcytometry.TheresultsindicatedthattheendothelialspecificmarkervWFwasexpressedbythecolonycells,GMCSFpromotedtheproliferationofbonemarrowendothelialcellcoloniesandMTTconfirmedtheeffectofGMCSFonpromotingtheproliferationofbonemarrowendothelialcells.TheresultofdetectingcellcycleshowedthattherateofcellsenteringintoSphasewas9.3%inGMCSFaddedgroupandtherateofcellsenteringintoSphasewas2.1%incontrol.Therewasnosignificantdifferenceincellgrowthcurvebetweenthefirstpassageandfourthpassage.ItisconcludedthatGMCSFcanpromotetheproliferationofbonemarrowendothelialcells,theproliferationpotentialofbonemarrowendothelialcellsbetweenthefirstandfourthpassagenosignificantlychanges.

Keywordsbonemarrowendothelialcells;GMCSF;proliferation

JExpHematol2007;15(3):622-625

目前，已有許多報(bào)道證明內(nèi)皮細(xì)胞（endothelialcells,EC）、內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelialprogenitorcells,EPC）可以用來治療缺血性心臟病以及各種疾病引起的肢體缺血［1,2］也可以用于組織工程的血管構(gòu)建［3］，并取得了一定的成果。Kawamoto等［4］報(bào)道，EPC對(duì)缺血心臟病進(jìn)行治療具有良好的效果，一方面減少了缺血組織的面積，同時(shí)改善了心臟的功能。Kalka等［5］則報(bào)道了利用EPC對(duì)肢體缺血的小鼠模型進(jìn)行治療，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明了EPC能顯著增加缺血肢體的灌流，而且組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)缺血部位毛細(xì)血管的數(shù)目也大大增加。內(nèi)皮細(xì)胞的來源有多種，可以從外周血、臍血及骨髓中獲得［6］，而外周血中的內(nèi)皮祖細(xì)胞來源于骨髓。從病人自體的骨髓中獲得內(nèi)皮細(xì)胞，一方面來源比較方便，而且也可以避免GVHD的發(fā)生。但是由于骨髓基質(zhì)細(xì)胞種類多，難以分離純化骨髓內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮祖細(xì)胞。本研究用本實(shí)驗(yàn)室配制的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液（EndoM）體外培養(yǎng)小鼠骨髓細(xì)胞，分離純化骨髓內(nèi)皮細(xì)胞及內(nèi)皮祖細(xì)胞，并觀察粒巨噬系集落刺激因子（rmGMCSF）對(duì)小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞體外增殖的影響以及體外增殖后內(nèi)皮細(xì)胞增殖機(jī)能的改變，這對(duì)臨床運(yùn)用內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮祖細(xì)胞治療疾病有一定的指導(dǎo)意義。

動(dòng)物

昆明小鼠，由中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院動(dòng)物學(xué)部提供，雌雄不限，普通飲食。

主要試劑和儀器

IMDM為Gibco公司產(chǎn)品；新生牛血清購自杭州四季清生物制品研究所；重組小鼠粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子（rmGMCSF）為R&D公司產(chǎn)品；vWF抗體、CY3標(biāo)記的羊抗兔IgG為Sigma公司產(chǎn)品；MTT、二甲基亞砜（DMSO）為Sigma公司產(chǎn)品；酶標(biāo)儀為Awarens公司產(chǎn)品；CO2培養(yǎng)箱購自美國Forma。

小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞集落的培養(yǎng)

用頸椎脫臼法處死小鼠，在無菌條件下取出股骨，用IMDM沖出骨髓細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，取1×106個(gè)小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞種入1ml含有15%新生牛血清的EndoM培養(yǎng)體系，置于24孔板中，于37℃、5%CO2、飽和濕度下培養(yǎng)5天后,用胰蛋白酶消化，制成單細(xì)胞懸液，按每孔1×104個(gè)細(xì)胞種入24孔板，每組3孔。于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)15天后計(jì)數(shù)內(nèi)皮細(xì)胞集落數(shù)，以≥50個(gè)細(xì)胞的聚合計(jì)為1個(gè)集落。

內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)觀察及vWF的檢測

培養(yǎng)的骨髓內(nèi)皮細(xì)胞集落經(jīng)WrightGiemsa染色后，顯微鏡下觀察內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)。用間接免疫熒光法檢測骨髓內(nèi)皮細(xì)胞vWF。將內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)于24孔板內(nèi)放置的蓋玻片上，當(dāng)細(xì)胞間沒有明顯的間隙時(shí)，取出蓋玻片，用PBS清洗，用4%的多聚甲醛固定30分鐘，用PBS洗3次：2%的正常羊血清封閉4小時(shí)，加入vWF抗體，4℃過夜，用PBS洗3次，加入二抗CY3IgG，37℃孵育60分鐘,PBS洗3次：置于熒光顯微鏡下觀察。以本室建的小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞株［7］為陽性對(duì)照，骨髓成纖維細(xì)胞為陰性對(duì)照。

不同濃度的GMCSF對(duì)小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞形成集落的影響

取純化的小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)于24孔板中，每孔5000個(gè)細(xì)胞，在基本培養(yǎng)體系（含1%濃度EndoM）的基礎(chǔ)上分別加入5、10、25ng/ml的rmGMCSF，對(duì)照組不加入GMCSF，每組3孔。置于CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)15天，于倒置顯微鏡下記數(shù)集落數(shù)，≥50個(gè)細(xì)胞的聚合計(jì)為1個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞集落。

GMCSF對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖影響的MTT法測定

將純化的小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞按5000個(gè)/孔培養(yǎng)于96孔板，每孔0.2ml，每組3孔。實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)體系中分別加入5、25、100ng/ml的rmGMCSF，對(duì)照組內(nèi)不加。在37℃、5%CO2、飽和濕度下分別培養(yǎng)5天和10天，取出培養(yǎng)板吸去培養(yǎng)液，然后加入無血清的IMDM180μl和20μlMTT溶液，放入培養(yǎng)箱孵育4小時(shí)，吸去液體，各孔加入DMSO150μl，振蕩10分鐘，使結(jié)晶充分溶解。選擇492nm波長，在酶標(biāo)儀上測定各孔的光吸收值（OD492）。

生長曲線

純化的小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)于96孔板中，每孔5000個(gè)細(xì)胞，加0.2ml含15%新生牛血清的基本培養(yǎng)液，并加入25ng/ml的rmGMCSF。共種6組，每組3孔，培養(yǎng)5天后，分別于第7、9、11、13、15天用胰酶消化后計(jì)數(shù)細(xì)胞，每次3孔，求平均值，做出生長曲線。按公式DT=t×1g2/(1gN-1gN0)算出第1代內(nèi)皮細(xì)胞生長的倍增時(shí)間。

細(xì)胞周期的流式細(xì)胞術(shù)檢測

無菌條件下取小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞，按2×106個(gè)細(xì)胞種于6孔培養(yǎng)板中（2ml培養(yǎng)體系中含15%新生牛血清的EndoM），置于37℃、5%CO2、飽和濕度下培養(yǎng)5天，然后吸去培養(yǎng)液，加入兩種不同培養(yǎng)體系，對(duì)照組加含15%新生牛血清的IMDM，實(shí)驗(yàn)組加15%新生牛血清的IMDM和100ng/ml的rmGMCSF，每組各10孔，置于CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)3天后，用胰酶消化細(xì)胞，200×g,離心5分鐘，用PBS洗滌細(xì)胞2次之后，用300μlPBS重懸細(xì)胞，加入冰冷的乙醇（-20℃）約700μl（終濃度為70%），將細(xì)胞放于-20℃過夜處理后，用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期。

細(xì)胞傳代培養(yǎng)

取小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞，按2×106個(gè)細(xì)胞種于6孔培養(yǎng)板中（2ml體系中含15%新生牛血清的EndoM），置于37℃、5%CO2、飽和濕度下培養(yǎng)5天，然后吸去培養(yǎng)液，加入15%新生牛血清的IMDM培養(yǎng)液和100ng/ml的rmGMCSF，促使細(xì)胞融合，再按1∶4傳代于6孔板中，同樣加入15%新生牛血清的IMDM和100ng/ml的rmGMCSF，等細(xì)胞生長至融合，按1∶4傳代，加入相同培養(yǎng)體系。按上述方法傳4代后，繪制生長曲線，方法同前。公式DT=t×1g2/(1gN-1gN0)算出第4代內(nèi)皮細(xì)胞生長的倍增時(shí)間，并與第1代的倍增時(shí)間進(jìn)行比較。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為3次結(jié)果，以mean±SD表示。不同處理組兩組間比較采用t檢驗(yàn)，應(yīng)用SPSS軟件分析，P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

細(xì)胞形態(tài)每孔種入小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞5000個(gè)，對(duì)照組加基礎(chǔ)培養(yǎng)液,實(shí)驗(yàn)組在基礎(chǔ)培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上分別加入rmGMCSF5、10、25ng/ml。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組集落數(shù)均明顯增多（圖3），說明rmGMCSF對(duì)小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞的增殖有明顯刺激作用。

rmGMCSF對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響

小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)5、10天，分別進(jìn)行MTT的檢測，結(jié)果表明rmGMCSF對(duì)小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞生長促進(jìn)作用明顯，各組與對(duì)照組相比差異顯著（P<0.01）（圖4）。

GMCSF對(duì)EC細(xì)胞周期的影響

運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期，觀察GMCSF對(duì)EC細(xì)胞周期的影響。結(jié)果顯示GMCSF使細(xì)胞進(jìn)入S期的比例為9.3%，與對(duì)照組2.1%相比有明顯差別。此結(jié)果說明GMCSF能夠促使細(xì)胞進(jìn)入S期，加快細(xì)胞的分裂，從而促進(jìn)了細(xì)胞的增殖（圖5）。Figure5.EffectofGMCSFoncellcycleofendothelialcells.A:grouptreatedbyGMCSF.B:controlgroup.

體外擴(kuò)增傳代對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響

圖6為小鼠骨髓第1代和第4代內(nèi)皮細(xì)胞的生長曲線。利用計(jì)算公式［DT=t×1g2/(1gN-1gN0)］計(jì)算出第1、4代細(xì)胞生長的倍增時(shí)間分別為30.25±0.55小時(shí)、31.67±0.26小時(shí)。第1代與第4代的細(xì)胞倍增時(shí)間相比，無明顯差異，表明經(jīng)體外擴(kuò)增傳代4次，仍能保持傳代早期的增殖潛能。

Figure6.Growthcurveofthefirstandfourthpassagegenerationsofmurineboneendothelialcells.討論

國內(nèi)外對(duì)于骨髓內(nèi)皮細(xì)胞的純化報(bào)道較少，但已經(jīng)進(jìn)行了一些關(guān)于細(xì)胞因子對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖影響的研究，如Yonekura等［8］報(bào)道VEGF可以促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，Rieck等［9］則報(bào)道bFGF可促進(jìn)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的生長。我們此前曾報(bào)道了VEGF、bFGF、SCF、IL6、GMCSF等對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞株的增殖有促進(jìn)作用［10］。GMCSF對(duì)未經(jīng)轉(zhuǎn)化的骨髓內(nèi)皮細(xì)胞增殖的作用尚未見報(bào)道。本研究中，我們用本室配制的培養(yǎng)基在較短的時(shí)間內(nèi)純化了小鼠的骨髓內(nèi)皮細(xì)胞，vWF為陽性，并在此基礎(chǔ)上觀察了GMCSF對(duì)骨髓內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響。應(yīng)用基本培養(yǎng)基培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞集落時(shí)，形成的集落數(shù)較少，加入rmGMCSF后，集落生成明顯增多。MTT的結(jié)果亦支持GMCSF對(duì)小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞生長的刺激作用。細(xì)胞生長曲線的結(jié)果表明，在含GMCSF培養(yǎng)的條件下，內(nèi)皮細(xì)胞生長的倍增時(shí)間為30.25±0.55小時(shí)，經(jīng)4次傳代后細(xì)胞倍增時(shí)間無明顯延長，表明體外培養(yǎng)擴(kuò)增4代后，細(xì)胞仍能保持早期的增殖能力，GMCSF對(duì)骨髓內(nèi)皮細(xì)胞的體外增殖有明顯刺激作用。文獻(xiàn)報(bào)道內(nèi)皮細(xì)胞表面有GMCSFR的存在，而內(nèi)皮細(xì)胞本身也可以分泌GMCSF［11］。結(jié)合細(xì)胞周期測定的結(jié)果，可以認(rèn)為，GMCSF促內(nèi)皮細(xì)胞增殖的機(jī)制可能是GMCSF與GMCSFR結(jié)合，通過細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞使更多的細(xì)胞進(jìn)入S期來實(shí)現(xiàn)的。

【參考文獻(xiàn)】

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第3篇

【關(guān)鍵詞】人乳鐵蛋白；癌細(xì)胞；細(xì)胞增殖

人乳鐵蛋白(HumanLactoferrin，hLF)是主要存在于人乳清中的球蛋白，乳汁別是初乳中含量最高，具有廣譜抗菌、抗病毒、抗腫瘤等作用。國外有學(xué)者將其應(yīng)用于腫瘤患者的治療，但是對(duì)其作用機(jī)制的研究較少。目前國內(nèi)較少有關(guān)于hLF作用于細(xì)胞的報(bào)道，我們選用易早期轉(zhuǎn)移的鼻咽癌(NPC)細(xì)胞作為研究對(duì)象，以中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)、人肝臟細(xì)胞(L02)作為正常細(xì)胞對(duì)照，觀察hLF在體外是否具有抑制癌細(xì)胞生長的作用，探討hLF抗腫瘤的作用機(jī)制，從而為腫瘤的治療提供研究基礎(chǔ)，為臨床實(shí)驗(yàn)及應(yīng)用提供新的理論依據(jù)。

一、材料與方法

1.1材料人鼻咽癌細(xì)胞(CNE)、中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)、人肝臟細(xì)胞(L02)均購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞資源中心。重組hLF(Lot:L0520，溶于PBS中，儲(chǔ)存濃度5mg/ml，-20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?和噻唑藍(lán)(MTT，Lot:M2128)均購自Sigma公司。RPMI1640、胎牛血清購自HyClone公司。其他試劑均為分析純。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)各細(xì)胞系均應(yīng)用含10%胎牛血清和1%青鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基，5%CO2，37℃培養(yǎng)。

1.2.2MTT法檢測細(xì)胞增殖設(shè)空白對(duì)照組和hLF干預(yù)組。待細(xì)胞生長至對(duì)數(shù)生長期，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，接種數(shù)為5×104/孔。每組細(xì)胞設(shè)5個(gè)平行孔，各組細(xì)胞分別加入不同濃度的hLF(0，1.25×10-3,2.5×10-3，5×10-3，10×10-3，20×10-3，40×10-3g/L)，每孔均為200μl。作用24h后，加入MTT(5g/L，每孔20μl)，繼續(xù)培養(yǎng)4h，測定A570nm吸光度。

1.2.3細(xì)胞形態(tài)觀察細(xì)胞經(jīng)hLF處理后，傾去上層懸浮死細(xì)胞并用PBS洗兩遍，加入新鮮培養(yǎng)基。同樣處理對(duì)照孔細(xì)胞，將細(xì)胞置于倒置顯微鏡下，觀察細(xì)胞形態(tài)的變化。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用x±s表示，組間比較用方差分析。

二、結(jié)果

2.1重組hLF對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE、人肝臟細(xì)胞L02、中國倉鼠細(xì)胞CHO系的增殖能力的影響對(duì)CNE呈現(xiàn)劑量依賴性的抑制作用，而對(duì)正常細(xì)胞無抑制作用。人乳鐵蛋白對(duì)各細(xì)胞體外增殖的影響與空白對(duì)照比較:1)P<0.05

2.2細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察顯微鏡鏡下可見，空白對(duì)照組癌細(xì)胞密集成片生長，如鋪路卵石狀，細(xì)胞膜圓潤，透明，顆粒較少，細(xì)胞間界限清楚，并可隱約見到細(xì)胞核。hLF處理組癌細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯的改變，隨hLF濃度增加，細(xì)胞從正常的增殖旺盛的貼壁生長，逐漸表現(xiàn)為生長緩慢，黏附力降低，細(xì)胞變圓，細(xì)胞胞質(zhì)粗糙，細(xì)胞內(nèi)顆粒逐漸增多，且透明度降低，立體感較差，細(xì)胞形態(tài)完整性受損，而正常細(xì)胞在細(xì)胞鏡檢圖hLF作用下無顯著變化。

三、討論

hLF多種生物學(xué)功能通過免疫系統(tǒng)的激活與調(diào)節(jié)得以實(shí)現(xiàn)。Bezaul研究發(fā)現(xiàn)，乳鐵蛋白能抑制鼠實(shí)體瘤的生長和轉(zhuǎn)移。腫瘤內(nèi)注射LF，可以明顯的減小實(shí)體瘤的體積，且作用效果與LF干預(yù)天數(shù)相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，乳鐵蛋白的抗頭頸部腫瘤作用是通過抑制腫瘤細(xì)胞增殖實(shí)現(xiàn)的。Wolf等發(fā)現(xiàn)，人乳鐵蛋白通過阻斷頭頸部腫瘤細(xì)胞由G0到G1期的轉(zhuǎn)化來抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。人乳鐵蛋白對(duì)鼠的SCC細(xì)胞系生長的抑制作用，與劑量成正相關(guān)；而且人乳鐵蛋白抑制頭頸部細(xì)胞癌的作用是通過直接的細(xì)胞毒作用及系統(tǒng)性的免疫調(diào)節(jié)作用實(shí)現(xiàn)的。

Varadhachary等人做了大量的口服臨床試驗(yàn)，證實(shí)乳鐵蛋白無藥物相關(guān)的有害作用。鼻咽癌作為頭頸部腫瘤之一，其惡性程度較高，早期即可出現(xiàn)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床上有轉(zhuǎn)移至骨盆、肺、肝等多器官的病例。選用鼻咽癌細(xì)胞作為研究對(duì)象，具有一定的代表意義。

本研究結(jié)果顯示，人乳鐵蛋白可以抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖，且呈劑量依賴性，對(duì)正常細(xì)胞的增殖無明顯抑制作用。這一結(jié)果，為開發(fā)乳鐵蛋白的抗癌功效提供了理論依據(jù)。

【參考文獻(xiàn)】

第4篇

固定資產(chǎn)折舊額，是固定資產(chǎn)磨損價(jià)值貨幣表現(xiàn)，在一定時(shí)期內(nèi)提取折舊的數(shù)額，取決于固定資產(chǎn)的規(guī)模與固定資產(chǎn)的磨損程度，這是傳統(tǒng)會(huì)計(jì)核算折舊額時(shí)所遵循的原則。但在通貨膨脹、物價(jià)上漲過快的條件下，計(jì)算折舊時(shí)，除了仍應(yīng)遵循上述基本原則外，還應(yīng)當(dāng)考慮通貨膨脹、貨幣貶值的因素，因?yàn)橹挥羞@樣，才能保證所提折舊基金，能夠從使用價(jià)值上恢復(fù)原有規(guī)模。如1985年投資100萬元，購買每輛載重噸位4噸的10輛載重汽車，壽命期為10年，提取折舊100萬元，1995年這批汽車報(bào)廢，由于物價(jià)上漲，再用這100萬元折舊額就無法購買具有原使用價(jià)值的10輛載重汽車。因此，在新的條件下，折舊額應(yīng)當(dāng)要保證固定資產(chǎn)原有使用價(jià)值得以補(bǔ)償，這是折舊額應(yīng)當(dāng)遵循的原則之一，同時(shí)，亦是資產(chǎn)保值應(yīng)遵守的準(zhǔn)則。

二、折舊額的核算方法

（一）固定資產(chǎn)磨損價(jià)值貶值的量變規(guī)律。

為了正確地核算折舊額，即在通貨膨脹條件下，能抵補(bǔ)貨幣貶值的損失，在固定資產(chǎn)壽命期各個(gè)時(shí)間階段上所計(jì)算的折舊額之和，能夠滿足從使用價(jià)值上恢復(fù)原有固定資產(chǎn)規(guī)模的需要，這首先就需要分析固定資產(chǎn)磨損價(jià)值貶值的量變規(guī)律。

固定資產(chǎn)是長期使用的物質(zhì)資料，而生產(chǎn)性的固定資產(chǎn)是物質(zhì)產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的勞動(dòng)資料。因而，固定資產(chǎn)再生產(chǎn)的過程是：

購置建造一交付使用一報(bào)廢一再購置建造。

從上述過程可以看出：建（購）置是固定資產(chǎn)原始價(jià)值的始點(diǎn)，報(bào)廢是固定資產(chǎn)原始價(jià)值的終點(diǎn)。在壽命期中，固定資產(chǎn)每年在提取折舊后，其金額必要產(chǎn)生一個(gè)無形貶值量。這個(gè)貶值量的變化過程可用公式表示如下：

式中：Z代表固定資產(chǎn)原值；Z’代表貨幣貶值的損失量；Y代表年折舊額；L代表物價(jià)上漲率；l，2…n代表時(shí)序；n代表固定資產(chǎn)使用年限。

在通貨膨脹條件下，為了避免固定資產(chǎn)貶值的損失，在核算折；日時(shí)，應(yīng)當(dāng)把貶值（Z’）加到折舊額中，進(jìn)入產(chǎn)品成本，待產(chǎn)品出售后，收回折舊以滿足更新固定資產(chǎn)的需要。

（二）核算折舊的公式設(shè)想。

上面從遞減折舊的觀點(diǎn)，考察固定資產(chǎn)逐年遞減的貶值量的變化規(guī)律的，但為了正確計(jì)算年折舊額，可以從另外一個(gè)角度觀察這個(gè)問題，即一方面以整個(gè)固定資產(chǎn)原值為基數(shù)，隨著時(shí)間的推移，由于通貨膨脹，貨幣貶值，可把逐年貶值量加到固定資產(chǎn)原值中去，使固定資產(chǎn)從其生命的始點(diǎn)到生命的終點(diǎn)，仍能保值。另一方面每年提取的折舊額，從第～年末開始，直至折舊終止為止亦逐年加進(jìn)一個(gè)貶值額，并假定固定資產(chǎn)在報(bào)廢時(shí)無殘值，則可建立如下公式：

把上述方程作為如下整理，則：

整理后簡得：

現(xiàn)仍以本文前面購買10輛汽車為例：

Z=100萬元，n=10年

則該批汽車的年折舊額為：

計(jì)算結(jié)果，每年提取13．8909萬元，在10年物價(jià)總水平上升87．186%的條件下，在10年后仍然能夠購買載重量為4噸的10輛載重汽車。然而按傳統(tǒng)的方法計(jì)算折舊，即100萬元10年=10萬元，在通貨膨脹條件下，所計(jì)算的折舊總額，是無法按照原有固定資產(chǎn)使用價(jià)值規(guī)模更新全部固定資產(chǎn)，即無法保證固定資產(chǎn)保值的。

三、核算折舊額的幾個(gè)具體問題

通過實(shí)例證明，筆者認(rèn)為上面所設(shè)計(jì)并經(jīng)過推導(dǎo)，論證所建立的在通貨膨脹條件下，計(jì)算折舊額的公式是科學(xué)的，但在應(yīng)用公式時(shí)，仍有下列問題需做進(jìn)一步的研究。

（一）價(jià)格指數(shù)的選擇。

通貨膨脹，物價(jià)上漲，這是一個(gè)普遍的問題。但在現(xiàn)實(shí)經(jīng)濟(jì)生活中，由于各種商品在國計(jì)民生中的作用不同，因而其物價(jià)上漲幅度是不相同的。因此，在我國實(shí)際工作中編制有各種性質(zhì)的價(jià)格指數(shù)。那么在計(jì)算固定資產(chǎn)折舊額時(shí)，應(yīng)當(dāng)采用哪種價(jià)格指數(shù)為宜呢？筆者認(rèn)為，應(yīng)當(dāng)采用國家統(tǒng)計(jì)局編制的固定資產(chǎn)投資價(jià)格指數(shù)。這一指數(shù)綜合反映我國固定資產(chǎn)投資價(jià)格的變動(dòng)程度，而且與折舊額的聯(lián)系最為密切。

（二）固定資產(chǎn)貶值率總額。

固定資產(chǎn)折舊的計(jì)算是一個(gè)十分重要經(jīng)濟(jì)問題，它關(guān)系到正確評(píng)價(jià)企業(yè)經(jīng)濟(jì)效益與國家財(cái)政收入等問題。因此國家財(cái)政部門應(yīng)當(dāng)根據(jù)固定資產(chǎn)投資價(jià)格總指數(shù)與分類指數(shù)，考慮到未來一段時(shí)期內(nèi)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的趨勢，對(duì)價(jià)格變動(dòng)作出預(yù)測，并以定額參數(shù)的形式公布，供各企業(yè)計(jì)算折舊時(shí)采用。當(dāng)然我們不否認(rèn)制定定額參數(shù)即貨幣貶值的定額參數(shù)是十分復(fù)雜的工作。但為了保證這項(xiàng)工作的準(zhǔn)確性與科學(xué)性，可以在預(yù)測的基礎(chǔ)上經(jīng)有關(guān)專家討論，爾后經(jīng)有關(guān)權(quán)威機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)，再行公布采用。

（三）定額貶值率與實(shí)際貶值率的問題。

貨幣定額貶值率與實(shí)際貶值率是要發(fā)生離差的，因此，根據(jù)定額貨幣貶值率計(jì)算的折舊額和實(shí)際貨幣貶值率計(jì)算的數(shù)值之間，必須要產(chǎn)生一個(gè)差數(shù)，為此需要調(diào)整。一般來講，在年度執(zhí)行過程中，可按貨幣定額貶值率計(jì)算，待年終決算時(shí)，再根據(jù)實(shí)際貨幣貶值率進(jìn)行調(diào)整，其公式如下：

YI=Y[l＋（L1－L）]

式中：YI代表調(diào)整后的折舊額；Y代表按貨幣定額或預(yù)計(jì)貶值率折舊額；LI代表實(shí)際貨幣貶值率；L代表定額貨幣貶值率。

設(shè)Y=13．8909萬元；L1＝0．07；L＝0．0647

第5篇

患兒11例，平均年齡2-4歲，11例患兒的臨床表現(xiàn)依次為:淋巴結(jié)腫大(76%，19/25)，肝脾腫大(72%，18/25)，皮疹(60%，15/25)，骨質(zhì)浸潤(52%，13/25)，貧血(52%，13/25)，發(fā)熱(52%，13/25)，肺部浸潤(44%，11/25)。實(shí)驗(yàn)室檢查血象、骨髓像、肺部x線缺乏特異性表現(xiàn);骨骼X線病變以溶骨性骨質(zhì)破壞多見;頭顱CT/MRI為診斷顱底骨質(zhì)破壞和蝶鞍病變的重要方法。患兒確診為朗細(xì)胞組織細(xì)胞增生癥。

治療

本病屬于免疫系統(tǒng)疾病，治療該病癥必須增強(qiáng)免疫力，可以注射"免疫抑制劑"治療。

2護(hù)理

護(hù)理計(jì)劃及早制定?；純核家环N罕見的疾病，盡快確診，積極配合醫(yī)生迅速和有效地使所有援助檢查，皮膚科，兒科和其他科室會(huì)診。對(duì)這種嚴(yán)重的疾病評(píng)估，獲取相關(guān)信息，并與醫(yī)生的治療方案，孩子們組織討論，制定了詳細(xì)的護(hù)理計(jì)劃，認(rèn)真落實(shí)和不斷改進(jìn)的條件，并根據(jù)合理的謹(jǐn)慎措施轉(zhuǎn)變。

2.1發(fā)燒護(hù)理  密切觀察體溫變化，每天6次測量體溫恢復(fù)正常后3天，每天一次衡量，臥床休息，補(bǔ)充營養(yǎng)和液體的溫度后，及時(shí)更換汗?jié)褚路?，以防止滴濕疹的發(fā)生。

 

2.2心理護(hù)理  兒童有康復(fù)的強(qiáng)烈愿望，通過耐心說服，消除恐懼的治療，治療可以有意識(shí)地給予精神上安慰。為家長密切合作進(jìn)行治療。

 

2.3 高蛋白飲食和營養(yǎng)，高維生素，好食物和合理的原則，以改善機(jī)體健康。增加人體的耐受化療，提高免疫力。特殊治療時(shí)，如嘔吐，嚴(yán)重且難以考慮飲食或靜脈高營養(yǎng)消耗的元素，以確保病人有足夠的熱量，改善營養(yǎng)狀況。

2.4病人的病情在手術(shù)前仔細(xì)觀察，觀察腹部疼痛，位置，范圍，腹脹情況排氣排便情況的性質(zhì)，使快速，皮膚準(zhǔn)備，術(shù)前皮膚測試等，禁用止痛藥，以防掩蓋病情。

2.5 患者手術(shù)后回到病房，以枕平臥4?6小時(shí)，頭側(cè)面，保持呼吸通暢，必要時(shí)給予吸氧。麻醉前作出明確，監(jiān)測有無嘔吐，腹脹，排氣排便情況，保持引流通暢胃腸減壓生命體征及腹部癥狀密切觀察，并觀察引流液，顏色和數(shù)量的性質(zhì);禁止在食品，良好的口腔護(hù)理，根據(jù)醫(yī)生的意見合理補(bǔ)充水分和電解質(zhì)溶液;術(shù)后早期的半臥位，鼓勵(lì)早期活動(dòng)，防止腸粘連，這將有利于身體恢復(fù);蠕動(dòng)恢復(fù)。適當(dāng)?shù)娘嬍硲?yīng)少量多餐，逐漸結(jié)束，并觀察是否進(jìn)食后腹痛，腹脹，嘔吐等癥狀，如果上述癥狀，應(yīng)暫停進(jìn)食，看看是否有腸梗阻，吻合口狹窄等并發(fā)癥;該觀察傷口無出血，滲液，腫脹，保持傷口敷料清潔干燥，防止尿液污染傷口。

2.6藥物不良反應(yīng)及護(hù)理   對(duì)化療藥物的胃腸道不良反應(yīng)的各種觀測是普遍的。在化療前或口服止吐藥物化療期間的飲食，以減少惡心和嘔吐，靜脈注射30分鐘要輕和消化。做三查七對(duì)的。（1）長春新堿導(dǎo)致末梢神經(jīng)炎，皮膚，肌肉和關(guān)節(jié)四肢麻木，疼痛，腹痛，肝，腎功能表現(xiàn)應(yīng)該是保護(hù)，注意血液中的變化，低白血細(xì)胞分離應(yīng)該很好對(duì)各種感染的保護(hù);（2）高劑量甲氨蝶呤結(jié)合6 - MP的時(shí)間。使胃腸道反應(yīng)，口腔炎，口腔潰瘍惡化。重要的骨髓抑制，國會(huì)議員在6個(gè)半小時(shí)，晚飯后口服，每日一次，以減輕反應(yīng)，同時(shí)加強(qiáng)口腔護(hù)理，甲氨蝶呤輸液，可能含有冰或冷水，以減少口腔黏膜和菜，氨濃度的甲氨蝶呤（3）VP16的使用，應(yīng)密切觀察有無泄漏，一旦發(fā)現(xiàn)，應(yīng)立即停止輸液，以避免組織壞死和（或）血酸靜脈炎。 16輸液的副總裁會(huì)引起性低血壓，它會(huì)促使孩子說謊，緩慢的速度靜脈滴注。

密切觀察病情變化，為爭取更多的搶救時(shí)間。密切觀察生命體征。啟用多功能心電監(jiān)護(hù)儀密切監(jiān)測呼吸，心率，血氧變化，所以在氧氣下降，及時(shí)救護(hù)。關(guān)閉的體溫，體溫過高，及時(shí)物理降溫，低溫，溫暖的加強(qiáng)，觀察使溫度維持在正常范圍內(nèi)，四肢溫暖。遵守一般條件。皮膚兒童，所有的重要器官損傷，嚴(yán)重的疾病，快速，并密切觀察皮膚出血，皰疹比以前或加重更好;肝臟是放大或縮小趨勢;觀察的臉部，嘴唇，身體膚色，反應(yīng)和尿色;觀察胃腸道出血：留置胃管，觀察出血，患兒棕色胃胃內(nèi)容物后退出了0.6個(gè)百分點(diǎn)后，蘇打水洗胃凝血酶鼻飼的效果，但病情反復(fù)。由于消化道出血，偶爾空腹的患兒，有低血糖的風(fēng)險(xiǎn)，血糖監(jiān)測跟蹤，使低血糖的及時(shí)修正。血液生化檢驗(yàn)顯示低血清鈣，補(bǔ)鈣時(shí)間，以防止鈣抽搐。皮膚，粘膜的護(hù)理。與身體皮膚，頭發(fā)，手，有出血，紫癜蓋腳，兒童大量散在皰疹，皰疹損壞個(gè)人，每天1:15000高錳酸鉀溶液擦洗，動(dòng)作輕柔，穿著柔軟的衣服，以免加重皮膚病變，破損的皮膚涂上百多邦?？谇挥脽o菌生理鹽水進(jìn)行常規(guī)口腔護(hù)理，以減少感染。患兒躁動(dòng)時(shí)易擦傷足跟部，用無菌紗布加以包扎。加強(qiáng)臀部護(hù)理，大小便后及時(shí)更換吸濕性好、柔軟的尿褲，保持全身皮膚清潔干燥。適時(shí)翻身，以免局部長期受壓。

第6篇

經(jīng)過全面、細(xì)致的一輪復(fù)習(xí)后，學(xué)生已基本掌握了教材知識(shí)，作為二輪復(fù)習(xí)的重點(diǎn)則應(yīng)切實(shí)加強(qiáng)對(duì)新課程標(biāo)準(zhǔn)和2012年考試說明的研究，以此制定復(fù)習(xí)目標(biāo)，這樣復(fù)習(xí)才有針對(duì)性和實(shí)效性。如：2012年考試說明中對(duì)細(xì)胞增殖內(nèi)容的要求。

從近幾年的高考來看，命題重點(diǎn)圍繞細(xì)胞周期中染色體行為和數(shù)目變化規(guī)律，減數(shù)分裂與有絲分裂的比較及圖像識(shí)別，減數(shù)分裂的過程及與遺傳的關(guān)系。那么學(xué)生在這塊內(nèi)容中到底還有哪些未落實(shí)到位？又該如何幫助學(xué)生有效解決這些問題？

一、典型錯(cuò)誤分析

【典例】圖為雄果蠅體內(nèi)某細(xì)胞分裂過程中，每條染色體上DNA含量變化(甲曲線)和染色體數(shù)目變化(乙曲線)。請據(jù)圖回答：

(1) CD段細(xì)胞中有( )條染色體，DE段有染色單體( )條，F(xiàn)G段細(xì)胞中有DNA( )個(gè)，DE段可形成四分體( )個(gè)。

(2)在A點(diǎn)若用3H標(biāo)記該細(xì)胞的DNA雙鏈，再將其轉(zhuǎn)入不含3H的培養(yǎng)基中

培養(yǎng)，在FG段一個(gè)細(xì)胞中的染色體總數(shù)和被3H標(biāo)記的染色體數(shù)分別為( ) ( )。

(3)若該細(xì)胞基因型為AaXbY，在分裂完成后產(chǎn)生了一個(gè)AYY的，則另三個(gè)的基因型分別為( )( )( )。

(4)該細(xì)胞某一條染色體的兩條單體相同位點(diǎn)出現(xiàn)不同基因的變化可發(fā)生在( )段。

該題考查目標(biāo)：有絲分裂與減數(shù)分裂的曲線辨析，減數(shù)分裂中染色體、DNA、單體的數(shù)目變化規(guī)律，染色體、DNA、脫氧核苷酸鏈之間的關(guān)系，及減數(shù)分裂與生物變異的聯(lián)系。通過學(xué)案反映出學(xué)生存在以下幾方面的問題：

1.基礎(chǔ)知識(shí)不扎實(shí)，記憶不牢，知識(shí)點(diǎn)混淆。例如：在第(1)小題中學(xué)生由于把果蠅染色體數(shù)4對(duì)記成了4條從而造成CD段錯(cuò)寫為含4條染色體。由于不明確四分體的概

(3)糾錯(cuò)補(bǔ)偏，反思內(nèi)化。有一句教育的真理“世界上最有價(jià)值的習(xí)題不是專家出的習(xí)題，而是自己做錯(cuò)的習(xí)題”。二輪復(fù)習(xí)抓錯(cuò)題相當(dāng)機(jī)的導(dǎo)航燈一樣，它可以幫我們指明前進(jìn)的方向。學(xué)生在一輪復(fù)習(xí)中已做了大量試題，經(jīng)歷了多次模擬考試，難免出現(xiàn)許多錯(cuò)誤，若能指導(dǎo)學(xué)生將這些錯(cuò)誤進(jìn)行分類整理，就會(huì)發(fā)現(xiàn)反復(fù)出錯(cuò)的地方就是自己知識(shí)上的薄弱環(huán)節(jié)，這時(shí)就可針對(duì)性地翻閱書本，結(jié)合書本來解決知識(shí)漏洞，當(dāng)然有些錯(cuò)誤可能是學(xué)生不注意使用生物科學(xué)術(shù)語回答，畫圖表、寫實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不規(guī)范嚴(yán)謹(jǐn)?shù)仍斐傻?，通過糾錯(cuò)也可有效提醒學(xué)生對(duì)自己這方面問題的關(guān)注。

二輪復(fù)習(xí)不做題不行，但沉迷于題海也不行，關(guān)鍵要提高做題質(zhì)量?？偨Y(jié)歸納常見題型的解題規(guī)律、方法技巧，從而達(dá)到弄懂一道題，旁通一類題的目的。也可通過演練近幾年的高考真題親身感觸高考題的命題思路、設(shè)問方式，從中感悟解題技巧。

3.消除情感夢魘，增強(qiáng)自信。 美國著名心理學(xué)家Robert Rosenthal曾做過這樣一個(gè)實(shí)驗(yàn)：他從某個(gè)班級(jí)的花名冊中隨意挑選了幾個(gè)名字，并且告訴老師這些學(xué)生經(jīng)過測試智商較高。之后，老師便關(guān)注并鼓勵(lì)他們，這些學(xué)生也由于有了自信而努力學(xué)習(xí)。八個(gè)月之后，那些“高智商”的學(xué)生的成績竟有了驚人的進(jìn)步。這個(gè)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了自信的重要性。那么如何增強(qiáng)學(xué)生對(duì)考試的自信，以實(shí)現(xiàn)從容應(yīng)考呢？

(1)充分的考前準(zhǔn)備：多數(shù)學(xué)生都有這樣的體會(huì)：“一看到考題不難，緊張不安的情緒便會(huì)隨之減少，腦子不再麻木，思維也變得靈活了?！币虼耍记耙欢ㄒ龊弥R(shí)與技能雙重準(zhǔn)備，并針對(duì)考試中可能出現(xiàn)的復(fù)雜情況，進(jìn)行有目的的訓(xùn)練，做到胸有成竹，考試當(dāng)然也充滿信心。

(2)適當(dāng)?shù)男睦碚{(diào)節(jié)：既要正確對(duì)待壓力，但也不能給自己增加壓力。不過多去想考試成敗將會(huì)給自己帶來什么后果，尤其不夸大考試成敗的影響，樹立“天生我材必有用”的廣闊意境。

第7篇

【摘要】文章對(duì)生產(chǎn)制造企業(yè)價(jià)值鏈及價(jià)值鏈分析理論進(jìn)行總結(jié),指出價(jià)值鏈分析在制造企業(yè)內(nèi)部物流成本管理中的運(yùn)用有極強(qiáng)的優(yōu)越性。

【關(guān)鍵詞】價(jià)值鏈分析;制造企業(yè);內(nèi)部物流成本管理;運(yùn)用

物流成本作為企業(yè)“第三利潤源泉”,倍受各方的關(guān)注。物流成本管理的意義在于:通過對(duì)物流成本的有效把握,利用物流要素之間效益背反關(guān)系,科學(xué)、合理地組織物流活動(dòng),加強(qiáng)對(duì)物流活動(dòng)過程中費(fèi)用支出的有效控制,降低物流活動(dòng)中的物化勞動(dòng)和活勞動(dòng)的消耗,從而達(dá)到降低物流總成本,提高企業(yè)和社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益的目的。

目前,造成中國物流成本居高不下的關(guān)鍵因素是制造業(yè),困擾商品流程優(yōu)化的還是制造業(yè)。為了提高制造業(yè)的競爭力,要求從業(yè)人員能夠?qū)υ牧?、半成品、產(chǎn)成品以及相關(guān)的信息流動(dòng)做到7R,即正確的產(chǎn)品、正確的質(zhì)量、正確的條件、正確的顧客、正確的地方、正確的時(shí)間、正確的成本。這也正是現(xiàn)代物流管理的實(shí)質(zhì)。制造企業(yè)的物流成本管理中引入價(jià)值鏈理論,能對(duì)企業(yè)內(nèi)部物流作業(yè)流程進(jìn)行持續(xù)改善,以消除不必要的作業(yè);通過對(duì)物流成本進(jìn)行評(píng)價(jià),分析確立物流成本控制環(huán)節(jié),有利于幫助企業(yè)降低物流作業(yè)成本。

一、價(jià)值鏈及價(jià)值鏈分析方法

信息技術(shù)的廣泛應(yīng)用,使企業(yè)從價(jià)格競爭、產(chǎn)品競爭和個(gè)體競爭轉(zhuǎn)向價(jià)值競爭、服務(wù)競爭和網(wǎng)絡(luò)競爭,而持續(xù)的核心競爭優(yōu)勢對(duì)于企業(yè)后一種情況的競爭具有更加重要的戰(zhàn)略意義。價(jià)值鏈作為確定企業(yè)核心競爭優(yōu)勢的一種基本工具應(yīng)運(yùn)而生。它是一種系統(tǒng)性研究企業(yè)競爭優(yōu)勢的方法,其核心內(nèi)容是分解企業(yè)價(jià)值鏈、確定價(jià)值活動(dòng)成本,以價(jià)值最大化為目標(biāo)重構(gòu)價(jià)值鏈,建立其優(yōu)化結(jié)構(gòu),從而提升企業(yè)的核心競爭優(yōu)勢。價(jià)值鏈的優(yōu)化研究經(jīng)歷了從邁克爾·波特的傳統(tǒng)價(jià)值鏈、Peter·Hines的“集成物料價(jià)值的運(yùn)輸線”、JefferyF1Rayport和JohnJ1Sviokla的虛擬價(jià)值鏈,再到價(jià)值網(wǎng)理論的一個(gè)長期過程。

價(jià)值鏈已經(jīng)發(fā)展成為當(dāng)代網(wǎng)絡(luò)經(jīng)濟(jì)環(huán)境下的一種組織戰(zhàn)略思想和模式,它是以企業(yè)儲(chǔ)運(yùn)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)等業(yè)務(wù)流程為載體,以實(shí)現(xiàn)顧客價(jià)值最大化為直接目標(biāo)而形成的企業(yè)內(nèi)部價(jià)值活動(dòng)的系統(tǒng)性結(jié)構(gòu),為企業(yè)形成信心競爭優(yōu)勢、創(chuàng)造長期利潤提供了一種系統(tǒng)的、動(dòng)態(tài)的分析方法。

(一)生產(chǎn)制造企業(yè)的價(jià)值鏈

現(xiàn)代企業(yè)管理思想認(rèn)為企業(yè)是一個(gè)為最終滿足顧客需要而設(shè)計(jì)的一系列作業(yè)的集合體,企業(yè)本身就是一個(gè)由此及彼、由內(nèi)到外的作業(yè)鏈,每完成一項(xiàng)作業(yè)要消耗一定的資源,而作業(yè)的產(chǎn)生又形成一定的價(jià)值,轉(zhuǎn)移到下一個(gè)作業(yè),依此轉(zhuǎn)移,直至形成最終產(chǎn)品,提供給企業(yè)外部顧客。而最終產(chǎn)品作為企業(yè)內(nèi)部作業(yè)鏈的最后一環(huán),凝結(jié)了各個(gè)作業(yè)鏈所形成并最終提供給顧客的價(jià)值。因此,作業(yè)鏈同時(shí)又表現(xiàn)為價(jià)值鏈,作業(yè)耗費(fèi)與作業(yè)產(chǎn)出配比的結(jié)果,就是企業(yè)的盈利。價(jià)值鏈由多個(gè)作業(yè)組成,價(jià)值鏈內(nèi)信息的傳遞基本上具有雙向特征。根據(jù)價(jià)值鏈各個(gè)環(huán)節(jié)的特征,價(jià)值鏈可分為外部價(jià)值鏈和內(nèi)部價(jià)值鏈。外部價(jià)值鏈包括企業(yè)、供應(yīng)商、客戶等;內(nèi)部價(jià)值鏈主要包括生產(chǎn)活動(dòng)的作業(yè)活動(dòng)等。

(二)內(nèi)部價(jià)值鏈分析

低成本是企業(yè)取得任何競爭優(yōu)勢的有利保障。企業(yè)應(yīng)在營造企業(yè)核心競爭力的前提下,對(duì)內(nèi)部價(jià)值鏈進(jìn)行分析,主要是為了解決降低企業(yè)內(nèi)部成本問題。而這些分析工作都是以“作業(yè)”為中心,在整個(gè)過程中還須結(jié)合事前管理的統(tǒng)籌規(guī)劃、事中管理的實(shí)時(shí)控制和事后管理的分析考評(píng),以確認(rèn)企業(yè)的價(jià)值活動(dòng)有哪些,處于什么樣的分布狀態(tài),并將每個(gè)價(jià)值活動(dòng)所耗費(fèi)的成本與對(duì)產(chǎn)品價(jià)值的貢獻(xiàn)相比較,根據(jù)企業(yè)各個(gè)作業(yè)活動(dòng)在價(jià)值增值中的不同作用,將其進(jìn)行細(xì)分并采取措施加以改進(jìn)。

內(nèi)部價(jià)值鏈分析是將從基本的原材料到企業(yè)最終用戶之間的價(jià)值鏈分解成作業(yè)活動(dòng),以便理解成本的性質(zhì)和差異產(chǎn)生的原因,通過差別分析和成本分析,找出企業(yè)在價(jià)值生產(chǎn)過程中的利弊。企業(yè)為了實(shí)現(xiàn)其“股東價(jià)值最大化”的經(jīng)營目標(biāo),必須提高其作業(yè)產(chǎn)出,減少作業(yè)耗費(fèi),但并非所有的作業(yè)都能夠創(chuàng)造價(jià)值,這就需要溯本求源,分析哪些作業(yè)能夠增加價(jià)值,哪些作業(yè)不能增加價(jià)值,并盡可能消除不能創(chuàng)造價(jià)值的作業(yè),即使能創(chuàng)造價(jià)值的作業(yè),也應(yīng)盡可能減少其作業(yè)耗費(fèi),這一切都要借助于作業(yè)分析。為此,作業(yè)管理(Activity-basedManagement簡稱ABM)作為一種現(xiàn)代企業(yè)管理方法由此產(chǎn)生,作業(yè)分析主要過程如下:

1.確定作業(yè)。確定企業(yè)的價(jià)值生產(chǎn)過程,根據(jù)作業(yè)對(duì)競爭優(yōu)勢的貢獻(xiàn)大小區(qū)分作業(yè),從而確定產(chǎn)品或服務(wù)的總成本構(gòu)成。

2.評(píng)估作業(yè)。識(shí)別各過程的中間環(huán)節(jié),從而確定獲得相關(guān)成本優(yōu)勢的機(jī)遇。每項(xiàng)物流作業(yè)之間不是完全獨(dú)立的,在同一條價(jià)值鏈上是相互依賴的。例如,企業(yè)產(chǎn)品制造的實(shí)現(xiàn)必須依賴于原材料的儲(chǔ)備以及運(yùn)輸,而這種相互之間的依賴性有時(shí)也會(huì)造成一些不必要的重復(fù)操作,從而影響整體的效率以及效益。因此,通過價(jià)值鏈分析法辨別出冗余環(huán)節(jié),按各個(gè)作業(yè)活動(dòng)在價(jià)值增值中的作用不同,將其細(xì)分為直接增值作業(yè)活動(dòng)、輔助增值作業(yè)活動(dòng)、非增值作業(yè)活動(dòng)和逆增值作業(yè)活動(dòng),從而確定價(jià)值創(chuàng)造過程中的核心環(huán)節(jié)。

3.優(yōu)化作業(yè)。通過對(duì)作業(yè)活動(dòng)的評(píng)估,擬定改進(jìn)方案。對(duì)于直接增值作業(yè)活動(dòng),應(yīng)在保持其增值效果不降低的前提下,盡可能提高運(yùn)行效率,減少資源耗費(fèi)和占用;對(duì)于輔助增值作業(yè)活動(dòng),有必要在維持其輔助作用不變的情況下,盡可能減少資源占用;對(duì)于非增值作業(yè)活動(dòng)和逆增值作業(yè)活動(dòng),則應(yīng)盡可能減少和避免,達(dá)到優(yōu)化作業(yè)的目的。

同時(shí),管理深入到作業(yè)水平,進(jìn)行作業(yè)分析,就要求變革傳統(tǒng)的成本計(jì)算,使其與之相適應(yīng),即要求成本計(jì)算深入到每一作業(yè),進(jìn)行作業(yè)成本計(jì)算。由此,基于企業(yè)價(jià)值鏈的作業(yè)成本法應(yīng)運(yùn)而生。

二、價(jià)值鏈分析在制造企業(yè)內(nèi)部物流成本管理中的運(yùn)用

對(duì)于生產(chǎn)制造型企業(yè)來講,生產(chǎn)制造賦予了最終商品的大部分價(jià)值,是企業(yè)的核心業(yè)務(wù)單元。另外,現(xiàn)代的制造型企業(yè)在不斷加大生產(chǎn)力度的同時(shí)也十分注重客戶的售后服務(wù),不斷加大其在產(chǎn)品價(jià)值增值過程中的作用,從而逐漸地形成企業(yè)的核心競爭力。

企業(yè)的物流過程從價(jià)值鏈角度分析,不但有利于節(jié)省自身的業(yè)務(wù)運(yùn)作時(shí)間、合理利用資源,而且有利于為最終的顧客提供最有價(jià)值的服務(wù),在企業(yè)的物流鏈上找到價(jià)值增值過程中貢獻(xiàn)最大的核心環(huán)節(jié)。同時(shí),利用價(jià)值鏈分析法企業(yè)的物流活動(dòng)也不再簡單地以全面削減成本為目的,而是在各價(jià)值生產(chǎn)過程中降低成本、提高效率。

制造業(yè)企業(yè)內(nèi)部物流主要包括:供應(yīng)物流,即上游企業(yè)對(duì)本企業(yè)所需物資供應(yīng)的物流活動(dòng);原材料、零配件部件物流,即企業(yè)內(nèi)部所需要原材料、零配件部件從供應(yīng)倉庫或者上游企業(yè)直接供應(yīng)到生產(chǎn)線的物流活動(dòng);半成品物流,即生產(chǎn)過程中的半成品從上一道工序(或車間)到下一道工序(或車間)的物流活動(dòng);產(chǎn)成品物流,即生產(chǎn)出的成品或最終產(chǎn)品,從生產(chǎn)線到產(chǎn)成品倉庫或者直接到下游企業(yè)的物流活動(dòng);回收物流,即生產(chǎn)過程中的廢棄物丟棄或再生所發(fā)生的物流活動(dòng)。

內(nèi)部物流的合理化可以促進(jìn)生產(chǎn)過程中資源配置的合理化和工藝流程的合理化,從而大大提高制造業(yè)企業(yè)的競爭力。目前,許多企業(yè)已經(jīng)開始意識(shí)到內(nèi)部物流管理對(duì)于降低成本、提高物流效益,改善企業(yè)管理的重要作用,紛紛優(yōu)化企業(yè)內(nèi)部物流管理,建立內(nèi)部物流部門,對(duì)訂單、庫存、運(yùn)輸、倉儲(chǔ)、加工等物流各環(huán)節(jié)或全過程實(shí)施高效的管理計(jì)劃和控制,促進(jìn)企業(yè)可持續(xù)發(fā)展,增強(qiáng)企業(yè)核心競爭力。

但現(xiàn)有企業(yè)內(nèi)部的物流管理存在著許多軟肋與制約:

一是傳統(tǒng)的管理理念、機(jī)制、方式等影響企業(yè)內(nèi)部物流效率的提高。轉(zhuǎn)二是企業(yè)內(nèi)部物流環(huán)節(jié)縱、橫向聯(lián)合薄弱。

三是物流成本核算缺乏財(cái)務(wù)標(biāo)準(zhǔn),責(zé)任主體不清,物流管理效益難以凸現(xiàn)。

四是對(duì)現(xiàn)代物流的研究較滯后,缺乏專業(yè)人才,實(shí)際操作經(jīng)驗(yàn)少等。

三、基于價(jià)值鏈分析方法的優(yōu)越性

基于價(jià)值鏈分析的成本觀是成本管理從價(jià)值保證和價(jià)值增加兩個(gè)視角來進(jìn)行的。由此,價(jià)值鏈成本管理實(shí)際上也就具有了雙重的性質(zhì):一是控制資源的必要而足夠的投入,從而保證顧客價(jià)值(表現(xiàn)為保證提供合格產(chǎn)品);二是控制資源的耗費(fèi),以提供盡可能多的顧客價(jià)值(表現(xiàn)在保證質(zhì)量前提下的較低價(jià)格)。

通過價(jià)值鏈分析,對(duì)外能識(shí)別并確保企業(yè)在行業(yè)或產(chǎn)業(yè)中的優(yōu)勢地位和核心地位,從而能夠在整體價(jià)值鏈顧客價(jià)值最大化的前提下,通過價(jià)值讓渡等方式結(jié)成戰(zhàn)略聯(lián)盟而形成優(yōu)勢價(jià)值鏈聯(lián)盟,以使企業(yè)確保自身的優(yōu)勢戰(zhàn)略定位;對(duì)內(nèi)運(yùn)用價(jià)值鏈分析法來考察企業(yè)各項(xiàng)活動(dòng)及其相互關(guān)系,能夠盡可能消除不增加價(jià)值的作業(yè),降低可增加價(jià)值作業(yè)的資源消耗,能更全面地分析企業(yè)成本的構(gòu)成,從而避免使用傳統(tǒng)成本管理方法的缺陷。

因此,基于價(jià)值鏈的成本管理具有以下優(yōu)勢:

(一)充分考慮了降低成本的相對(duì)性問題

成本的降低有絕對(duì)成本降低和相對(duì)成本降低之分。絕對(duì)成本降低是通過一定的途徑使成本的發(fā)生額低于一定的水平(標(biāo)準(zhǔn)或預(yù)算);相對(duì)成本降低是將成本與作業(yè)的質(zhì)量、效率以至最終與企業(yè)效益聯(lián)系起來,它并不單純追求成本絕對(duì)額的降低,而是追求成本效益的不斷提高。

(二)抓住了成本管理的關(guān)鍵即作業(yè)問題

基于價(jià)值鏈的成本管理從研究導(dǎo)致成本發(fā)生的作業(yè)及作業(yè)結(jié)構(gòu)開始,通過對(duì)作業(yè)及作業(yè)結(jié)構(gòu)的優(yōu)化、改造來達(dá)到提高成本效益的目的,因而這種成本管理抓住了成本問題的關(guān)鍵。

(三)擴(kuò)大了傳統(tǒng)成本管理的控制范圍

基于價(jià)值鏈的成本管理在研究成本問題時(shí)不僅要考察生產(chǎn)作業(yè),還要考察非生產(chǎn)作業(yè);不僅考察基本作業(yè),還要考察輔助作業(yè);不僅要考察本企業(yè)的價(jià)值鏈,而且要考察競爭對(duì)手、供應(yīng)商、銷售渠道、顧客甚至整個(gè)行業(yè)的價(jià)值鏈,以尋求廣泛提高本企業(yè)成本效益的途徑。

(四)更為全面地考慮了成本管理中的相關(guān)問題

基于價(jià)值鏈的成本管理追求的是整個(gè)價(jià)值鏈效益的優(yōu)化,這就要求成本管理須正確處理作業(yè)與作業(yè)之間,業(yè)務(wù)流程與業(yè)務(wù)流程之間,本企業(yè)價(jià)值鏈與供應(yīng)商、銷售渠道之間的關(guān)系;要求通過優(yōu)化這些關(guān)系來提高整個(gè)價(jià)值鏈的效益,而不能為獲得局部利益損害整體利益,也不能為了短期利益而損害長期利益。

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