時間：2023-03-23 15:18:06
序論：在您撰寫農(nóng)業(yè)碩士畢業(yè)論文時，參考他人的優(yōu)秀作品可以開闊視野，小編為您整理的7篇范文，希望這些建議能夠激發(fā)您的創(chuàng)作熱情，引導(dǎo)您走向新的創(chuàng)作高度。
—畢業(yè)流程
1.客戶提出要求：包括專業(yè)、畢業(yè)論文方向、需要多少字、具體題目提綱、什么時候要等問題。
2.根據(jù)顧客說好的要求，按照收費標(biāo)準(zhǔn)，談好價格。
3.客戶付50%的定金
4.我方安排寫作
5.交50%的論文給客戶審核，客戶審核沒問題，將余下的50%付清
6.交付全部論文
7.后期的修改，在說好的要求內(nèi)都是包過的，直到畢業(yè)論文通過為止。
—畢業(yè)范圍
（1） 語言表述a.論文應(yīng)層次分明、數(shù)據(jù)可靠、推理嚴謹、立論正確。論述必須簡明扼要、重點突出，對同行專業(yè)人員已熟知的常識內(nèi)容，盡量減少敘述。b.論文中如出現(xiàn)一些非通用性的新名詞、新術(shù)語或新概念，需立即做出解釋。（2） 標(biāo)題和層次a.層次要清楚，標(biāo)題要重點突出，．畢業(yè)論文應(yīng)采用漢語撰寫；一般由七部分組成，依次為：（1）題目，（2）中文摘要，（3）關(guān)鍵詞，（4）目錄，（5）正文，（6）參考文獻。2、各部分具體要求如下：論文題目：應(yīng)是整個論文總體內(nèi)容的體現(xiàn)，要引人注目，力求簡短，25字以內(nèi)。字體為宋體小二號。摘 要：中文摘．求英語專業(yè)畢業(yè)論文格式模版word版的完整的畢業(yè)論文格式范文，要PDF或Word格式，最好能發(fā)給我郵箱word畢業(yè)論文格式的設(shè)置在word2007中怎樣實現(xiàn)畢業(yè)論文格式word高手，懂word弄過畢業(yè)論文格式的請進。
畢業(yè)論文格式
畢業(yè)論文格式總改不對老師不讓過怎么辦？內(nèi)蒙古財經(jīng)學(xué)院繼續(xù)教育學(xué)院 畢業(yè)論文格式的具體要求求英語專業(yè)畢業(yè)論文格式模版word版的本科畢業(yè)論文格式誰有？求畢業(yè)論文格式，平面設(shè)計專業(yè)我想要一個實用《畢業(yè)論文》格式，我要套論文用的用的，越快越好？能給嗎？請問哪位知道西南大學(xué)碩士畢業(yè)論文格式？還有腳注有什么特別要求？請求2011最新格式物流管理畢業(yè)論文順序：中央電大畢業(yè)論文題目→目錄→有人教教我大學(xué)畢業(yè)論文的格式關(guān)于房地產(chǎn)營銷的畢業(yè)論文設(shè)計，包括開題報告什么的，怎么寫，給發(fā)了我給大學(xué)生畢業(yè)論文2年了，格式熟練，去年寫了幾百篇基本都過了。畢業(yè)論文開題報告怎么寫啊？還有論文的格式什么，我都不懂啊，求各位江西師大自考本科畢業(yè)論文格式具體是怎樣的？畢業(yè)論文具體格式是怎么樣的，有關(guān)環(huán)保的畢業(yè)論文范文有嗎？
哪位大哥知道四川農(nóng)業(yè)大學(xué)的畢業(yè)論文格式，．
文題.[學(xué)位論文]. 授予單位所在地，授予單位，授予年⑤專利[序號] 申請者. 專利名. 國別，專利文獻種類，專利號，出版日期⑥技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)[序號] 責(zé)任者. 技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)代號. 標(biāo)準(zhǔn)順序號—年.技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)名稱. 出版地，出版者，出版日期7. 致謝致謝中主要感謝導(dǎo)師和對論文工作有直接貢獻及幫助的人士和單位。8. 附錄主要列入正文內(nèi)過分冗長的公式推導(dǎo)，供查讀方便所需的輔數(shù)學(xué)工具或表格；重復(fù)性數(shù)據(jù)圖表；論文使用的符號意義、單位縮寫、程序全文及其說明等。二、管理和人文學(xué)科類論文撰寫格式管理和人文學(xué)科的論文應(yīng)包括對研究問題的．（各位大哥大姐四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可以專升本嗎？?？粕梢赞D(zhuǎn)成本科生讀本科生的專業(yè)嗎？哪物流管理畢業(yè)論文格式？ 哪位大俠知道，請問有人知道四川農(nóng)業(yè)大學(xué)遠程教育的學(xué)歷受社會承認嗎？急知，誰知道四川農(nóng)業(yè)大學(xué)2008和2009年的美術(shù)專業(yè)錄取分數(shù)是多少，。如題，小弟今年畢業(yè)．
關(guān)鍵詞：近代江西農(nóng)村經(jīng)濟、研究現(xiàn)狀、評述
一、研究現(xiàn)狀分析
1. 關(guān)于近代江西農(nóng)村經(jīng)濟的整體研究方面。這方面的研究起步比較早，其中最有代表性的成果是萬振凡、吳小衛(wèi)著《近代江西經(jīng)濟研究》，系統(tǒng)的探討了江西農(nóng)村經(jīng)濟發(fā)展的歷程、近代的江西農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、近代江西農(nóng)業(yè)科技發(fā)展、近代江西農(nóng)業(yè)的賦稅、近代江西農(nóng)業(yè)發(fā)展的手工業(yè)、近代農(nóng)村階級關(guān)系的演變、近代農(nóng)業(yè)的自然災(zāi)害、近代江西農(nóng)村商品經(jīng)濟發(fā)展緩慢的原因多個層次的問題。
2. 關(guān)于近代江西農(nóng)、副產(chǎn)品貿(mào)易的研究。這方面研究的主要學(xué)者有萬振凡、胡水鳳、吳贅、周海華等人。萬振凡、吳小衛(wèi)著《近代江西經(jīng)濟研究》對這一問題也有所涉及，探討了農(nóng)產(chǎn)品的貿(mào)易，對農(nóng)產(chǎn)品的貿(mào)易量、商品率、農(nóng)產(chǎn)品市場等具體問題進行了分析，最后對其商品率的原因進行了分析。胡水鳳對近代江西茶葉、夏布兩種農(nóng)產(chǎn)品進行了一個研究，探討了江西種茶面積的變化、茶產(chǎn)量的增減、茶價格的變化及夏布的生產(chǎn)和銷售等具體問題。關(guān)于江西茶業(yè)研究，比較重要的還有周付華的研究，他從中長時段出發(fā)對九江開埠后，九江茶市進行了研究，分析了九江開埠后帶來的九江茶市的發(fā)展與衰落。吳贅、周海華等對近代江西漁業(yè)進行了研究。吳贅重點探討了民國時期，鄱陽湖湖區(qū)的漁業(yè)發(fā)展變遷以及鄱陽湖漁業(yè)發(fā)展與地方經(jīng)濟、社會、政治的關(guān)系。周海華則主要對江西的漁業(yè)進行了簡單的述論，包括主要漁場分類及其區(qū)域、捕魚方法、魚產(chǎn)量的加工與貿(mào)易。此外，許金華還對近代江西的木材的外銷進行了初探，分析了江西木材的外銷情況。學(xué)界關(guān)于這方面的研究成果較多，但主要仍集中在茶葉、漁業(yè)的研究上。
3. 關(guān)于近代江西農(nóng)村市場的研究。主要的代表性學(xué)者有謝廬明、孫桂珍、游海華、白沙、萬振凡等。謝廬明研究的重點在贛南，對明清贛南地區(qū)農(nóng)村墟市的興起、發(fā)展、特點以及與地方社會經(jīng)濟變遷關(guān)系進行了研究，也探討了清代時期贛南地區(qū)獨特的廟會市場、客家文化影響下的贛南農(nóng)村市場，對贛南廟會市場的地域分布以及客家文化中的廟會、習(xí)俗在贛南農(nóng)村市場中起的整合作用進行了分析。孫桂芳通過對江西農(nóng)村的定性分析與定量分析相結(jié)合的方法，分析江西近代農(nóng)村市場的嬗變過程、市場體系的特點，得出江西農(nóng)村市場呈現(xiàn)出商品量及規(guī)模增大、市場網(wǎng)絡(luò)日益形成并逐步完善、商品市場結(jié)構(gòu)開始由傳統(tǒng)向近代轉(zhuǎn)型、土地市場形成、供求關(guān)系及競爭機制發(fā)育并其作用的一種復(fù)雜態(tài)勢。游海華則主要研究了贛閩粵邊區(qū)的市場及市場網(wǎng)絡(luò)的傳承與嬗變。白沙、萬振凡分析了農(nóng)村集市的發(fā)展，得出民國時期的農(nóng)村集市設(shè)施普遍增加、規(guī)模擴大、周期變短、布局日益合理，并推動了農(nóng)村經(jīng)濟的發(fā)展。
4. 關(guān)于20世紀30年代江西鄉(xiāng)村建設(shè)的研究。這方面研究是近代江西農(nóng)村研究的熱點之一，主要研究學(xué)者有溫銳、魏本權(quán)、曾志文、吳小彬等。溫銳分析了近代贛閩邊區(qū)的傳統(tǒng)鄉(xiāng)村民間借債、時期沿海人口、企業(yè)的入遷等因素對這一地區(qū)農(nóng)村社會經(jīng)濟的發(fā)展。魏本權(quán)則分析了1931至1949年江西農(nóng)村的合作運動，江西農(nóng)村合作運動是農(nóng)村建設(shè)運動的主要內(nèi)容。它擔(dān)負著江西農(nóng)村經(jīng)濟自治和社會自治的雙重功能，是江西農(nóng)村近代化的重要嘗試和努力。經(jīng)費的不足、理念的背離、環(huán)境的惡化制約了江西農(nóng)村合作運動的開展。曾志文、吳小彬的碩士論文都把研究重點放在了民國時期的江西農(nóng)村建設(shè)上來，曾志文分析了20世紀30年代的江西嚴重的經(jīng)濟危機和江西地方政府在危機預(yù)防、危機應(yīng)急、危機的恢復(fù)等機制;吳小彬則分析了20世紀30年代的江西出現(xiàn)的嚴重“三農(nóng)問題”以及針對這一問題江西地方政府為此開展的農(nóng)村合作運動、設(shè)立省農(nóng)業(yè)院、建立農(nóng)村實驗區(qū)等一系列措施。曾、吳二者的研究具有許多相似性。
二、 評價與展望
通過上文對近代江西農(nóng)村經(jīng)濟問題研究現(xiàn)狀的梳理，我們可知，關(guān)于這一問題的研究成果豐富，研究的領(lǐng)域得到擴展。21世紀前，學(xué)界對于這一問題的關(guān)注度還較低，主要的研究人物就是萬振凡、胡水鳳，主要研究成果為1998年出版的《近代江西經(jīng)濟研究》。進入21世紀后，游海華、謝廬明等一批學(xué)者投入到這一問題的研究，有一批碩士研究生也以近代江西農(nóng)村經(jīng)濟的相關(guān)問題作為研究論文選題，關(guān)于這一問題的研究隊伍得到壯大。研究隊伍的擴大，也必然產(chǎn)生成果的增多，領(lǐng)域的擴展?，F(xiàn)如今關(guān)于這一問題的研究成果涉及金融、市場、實驗區(qū)研究等各個方面;從從時段來看，研究重心主要集中在民國時期。
雖然關(guān)于這一問題的研究取得非常不錯的成績，但仍有許多需進一步加強的地方，主要表現(xiàn)在：
1. 研究的視角急需擴展。關(guān)于近代江西農(nóng)村經(jīng)濟的研究，大多是從社會史的視角進行分析，雖有謝廬明從客家文化視角出發(fā)對贛南農(nóng)村市場的研究，但總體仍是研究視角不夠全面，更缺少多視角、多學(xué)科的交叉綜合研究。學(xué)界關(guān)于這一問題還需引進經(jīng)濟史、政治史等其他的視角來擴展其研究。
2. 研究時段上忽略了晚清江西農(nóng)村經(jīng)濟的研究。學(xué)界一直將研究時段集中在民國，而往往忽略了其他時段的研究。晚清，受外來經(jīng)濟的沖擊、商路的變化、清政府為近代化而實行的改革，其必然也對江西農(nóng)村經(jīng)濟產(chǎn)生影響，但是關(guān)于這方面的研究不足。
3. 關(guān)于這一領(lǐng)域的研究，雖研究成果多，但有影響力的成果少。關(guān)于近代江西農(nóng)村經(jīng)濟的研究取得很大成績，成果雖多但普遍缺乏分量，啟發(fā)性小，在學(xué)界影響力小。對這一領(lǐng)域的學(xué)者仍需深入研究，提高成果的質(zhì)量，出幾篇有影響力、高水平、有啟發(fā)性的學(xué)術(shù)論文，甚至產(chǎn)生幾部相當(dāng)有分量的大作品。（作者單位：江西師范大學(xué)歷史文化與旅游學(xué)院）
參考文獻：
[1] 萬振凡、吳小衛(wèi)著：《近代江西農(nóng)村經(jīng)濟經(jīng)濟研究》，江西高校出版社，1998年版;《論近代江西農(nóng)業(yè)經(jīng)濟的發(fā)展》，《中國農(nóng)史》，1998年第3期。
[2] 胡水鳳：《近代江西茶葉的種植與加工》，《農(nóng)業(yè)考古》，1998年底期;《近代江西的茶價》，《農(nóng)業(yè)考古》1996年第2期;《略論近代江西r麻業(yè)》，《中國農(nóng)史》，1989年第4期;《近代江西夏布的產(chǎn)與銷》，《江西師范大學(xué)學(xué)報》，1986年第3期。
[3] 周海華：《近代江西漁業(yè)述論》，《古今農(nóng)業(yè)》，2002年第4期。
[4] 許金華：《近代江西木材外銷的歷史初探》，《農(nóng)業(yè)考古》，2010年第1期。
[5] 孫桂芳：《近代江西農(nóng)村市場研究》，江西師范大學(xué)2003年碩士畢業(yè)論文。
[6] 白沙、萬振凡：《民國江西農(nóng)村集市的發(fā)展》，《南昌大學(xué)學(xué)報》，2003年第4期。
[7] 萬振凡、宋青紅：《民國時期江西農(nóng)村發(fā)展實驗》，《古今農(nóng)業(yè)》，2005年第1期。
[8] 劉白楊：《近代江西鄉(xiāng)村實驗運動中的人物群體研究》，《農(nóng)業(yè)考古》，2014年第4期。
[9] 萬振凡、林頌華：《江西近代社會轉(zhuǎn)型研究》，中國社會科學(xué)出版社，2001年版。
[10] 吳燕等：《戰(zhàn)爭對近代江西傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)社會轉(zhuǎn)型的制約因素分析》，《農(nóng)業(yè)考古》，2009年第6期。
[11] 魏本權(quán)：《近代江西農(nóng)村合作運動述論》，江西師范大學(xué)2003年碩士畢業(yè)論文。
然而由于種種原因，近年來，作為衡量碩士研究生培養(yǎng)水平重要指標(biāo)的碩士學(xué)位論文的質(zhì)量卻不盡如人意。碩士研究生學(xué)位論文目標(biāo)不明、內(nèi)容空泛、層次不清、推理不嚴，以及答辯準(zhǔn)備不充分的現(xiàn)象十分普遍。目前，如何提高研究生學(xué)位論文質(zhì)量的問題已引起了各高校學(xué)者與專家們的廣泛關(guān)注。陶勇等[1]對農(nóng)科專業(yè)碩士學(xué)位論文寫作中存在的問題及原因進行了全面深入的分析，認為從實驗內(nèi)容到具體寫作，都存在或大或小的問題，而研究生與指導(dǎo)教師長期不懈的努力是逐步提高學(xué)位論文水平和研究生素質(zhì)的關(guān)鍵。首都經(jīng)濟貿(mào)易大學(xué)工商管理學(xué)院院長黃津孚則認為[2]要提高碩士論文的質(zhì)量，必須從學(xué)風(fēng)、導(dǎo)師和制度抓起。筆者擬就如何提高農(nóng)業(yè)院校研究生學(xué)位論文質(zhì)量的問題，談幾點認識。
堅持“化整為零”的原則
堅持“化整為零”的原則，即打破畢業(yè)前半年才開始著手撰寫畢業(yè)論文的傳統(tǒng)觀念，在入學(xué)初即告訴學(xué)生碩士學(xué)位論文寫作的一般程序和規(guī)范，幫助學(xué)生合理規(guī)劃三年的學(xué)習(xí)時間，將畢業(yè)論文化整為零的完成。督促學(xué)生從入學(xué)的第一天就要天天、月月、年年想到畢業(yè)論文的撰寫，時時處處為畢業(yè)論文的撰寫做準(zhǔn)備。這樣既可以增加學(xué)生的緊迫感，培養(yǎng)學(xué)生統(tǒng)籌安排的能力，同時也有利于學(xué)生主動將基本理論，基本知識的學(xué)習(xí)與科研實際相結(jié)合。首先，要求學(xué)生利用課余時間，在前期基礎(chǔ)課學(xué)習(xí)的過程中完成大量文獻的查閱工作，在入學(xué)半年后提交所選研究方向國內(nèi)外研究現(xiàn)狀和實驗方法的綜述，為寫好碩士畢業(yè)論文的前言、材料與方法以及參考文獻部分奠定堅實的基礎(chǔ)。解決學(xué)生因畢業(yè)論文撰寫時間倉促，導(dǎo)致質(zhì)量偏低的現(xiàn)象。
堅持 “三早”的原則
堅持貫徹“三早”原則，也就是早選題，早定題，早開題的原則。在學(xué)生入學(xué)初，準(zhǔn)備好一系列與導(dǎo)師研究相關(guān)的題目，比如：大豆油分研究；大豆蛋白質(zhì)品質(zhì)研究；大豆加工適應(yīng)性品質(zhì)研究；大豆種質(zhì)開發(fā)研究；大豆基因組研究等等，供學(xué)生按照自己的愛好選擇課題，激發(fā)學(xué)生的主題意識和主動發(fā)展的愿望。督促學(xué)生盡快選定研究方向，盡早開始文獻查閱。定期給予學(xué)生指導(dǎo)，培養(yǎng)學(xué)生掌握科技文獻檢索、資料查詢與閱讀的方法和能力，同時指導(dǎo)學(xué)生對查閱過的文獻的題目，來源等等按照參考文獻的正規(guī)格式進行相應(yīng)的詳細記錄，以備最后集中撰寫論文時，有的放矢，從而避免學(xué)生隨意堆砌參考文獻，甚至從網(wǎng)上下載，直接粘貼的現(xiàn)象。要求學(xué)生在入學(xué)半年后必須提交合格的開題報告，徹底改變學(xué)生不讀書，不了解學(xué)科動態(tài)的狀況。
堅持“步步為營、不欠賬”的原則
農(nóng)業(yè)生物技術(shù)專業(yè)具有季節(jié)性強，生育周期長的特點，因此，要想保證論文的各個環(huán)節(jié)都有充分的時間得以保質(zhì)保量的完成，在盡早開始進入試驗狀態(tài)的前提下，還要督促學(xué)生堅持做到“步步為營，不欠賬”，也就是要根據(jù)開題報告中工作進度計劃的安排，認真做好每一個階段的工作，比如，播種期做好播種計劃，適時播種，生育期做好各項生理指標(biāo)的檢測，在秋冬季進行分子遺傳學(xué)室內(nèi)分析等，對每一個階段的工作，數(shù)據(jù)要及時進行整理，總結(jié)，及時發(fā)現(xiàn)問題，及時解決問題，堅決杜絕將所有的原始數(shù)據(jù)堆積到最后分析。防止一旦發(fā)現(xiàn)問題，又沒有可能在短時間內(nèi)補救，只好編造數(shù)據(jù)的現(xiàn)象。保證研究生如期完成學(xué)位論文的撰寫，充分準(zhǔn)備，做好畢業(yè)論文的答辯。
三個“堅持”原則的貫徹可以全面提高學(xué)生的綜合能力和素質(zhì)。對于培養(yǎng)富有創(chuàng)新精神和實踐能力的人才具有重要的意義。首先，通過督促學(xué)生查閱大量的文獻，可以解決學(xué)生不讀書，不了解學(xué)科動態(tài)的問題，同時幫助學(xué)生拓寬相關(guān)知識面；其次，通過對試驗設(shè)計、試驗實施的過程嚴把質(zhì)量關(guān)，可以培養(yǎng)學(xué)生科學(xué)的態(tài)度及科學(xué)研究的能力，加強對研究生研究方法的教育，提高研究生的學(xué)術(shù)水平。第三，通過把好數(shù)據(jù)分析，論文撰寫及論文答辯的質(zhì)量關(guān)，可以提高學(xué)生的寫作水平，信息處理能力以及語言表達能力。三個“堅持”原則的貫徹使得提高碩士研究生學(xué)位論文質(zhì)量的工作落到實處，水到渠成的使學(xué)生具備了農(nóng)業(yè)現(xiàn)代化生產(chǎn)所急需的創(chuàng)造型人才必須具備的各項基本技能。
參考文獻：
論文致謝為提高研究生教育教學(xué)質(zhì)量，結(jié)合現(xiàn)階段我國農(nóng)業(yè)推廣碩士研究生的特點，在農(nóng)業(yè)推廣學(xué)課程教學(xué)中，對互動式教學(xué)模式進行了積極探索。下面是學(xué)術(shù)參考網(wǎng)小編為朋友們搜集整理的在職碩士畢業(yè)論文致謝，歡迎閱讀！
本文是在我的導(dǎo)師***教授的悉心指導(dǎo)下完成的。從課程的學(xué)習(xí)、論文的選題及最終定稿都傾注了導(dǎo)師的心血。導(dǎo)師嚴謹?shù)闹螌W(xué)態(tài)度，平易近人、誨人不倦的品格給我留下了深刻的印象，使我終生受益。在此，謹向?qū)煴硎咀钌钌畹木匆夂陀芍缘母兄x!
同日寸感謝******管理學(xué)院，感謝所有的授課和指導(dǎo)老師，對我在學(xué)業(yè)上的幫助和生活上的關(guān)心!正是你們孜孜不倦的傳道、授業(yè)、解惑，使我在思想上和學(xué)業(yè)上都取得了巨大的進步。
最后感謝在這兩年多的學(xué)習(xí)和生活中幫助、關(guān)心我的同學(xué)以及給我的論文提供許多寶貴素材的朋友們。有了這么多人的幫助，使我順利的完成了我的研究生階段學(xué)習(xí)，在今后的工作中，我會將這些人的幫助化為自己前進的動力。
在畢業(yè)之際衷心的祝愿你們生活美滿、前程似錦!
生物技術(shù)是分子遺傳學(xué)、生物化學(xué)、微生物學(xué)等基礎(chǔ)學(xué)科發(fā)展的產(chǎn)物。作為一種高新技術(shù),生物技術(shù)在整個科學(xué)領(lǐng)域中占據(jù)了越來越顯著的地位。作為世界新技術(shù)革命的重要組成部分,生物技術(shù)已經(jīng)成為人類徹底認識和改造自然界,克服人類自身所面臨的人口膨脹、糧食短缺、環(huán)境污染、疾病危害、能源資源匱乏等一系列重大問題的有效手段和工具[1]。
目前在黃瓜育種中,廣大科研工作者利用生物技術(shù)結(jié)合常規(guī)育種方法,創(chuàng)新了一大批含有優(yōu)異基因的黃瓜育種材料,培育出多個豐產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、多抗品種。生物技術(shù)在黃瓜遺傳育種上的應(yīng)用非常廣泛,下面介紹在這方面已取得的一些重要進展。
2分子標(biāo)記技術(shù)在黃瓜遺傳育種中的應(yīng)用
2.1黃瓜基因的分子標(biāo)記
開展基因分子標(biāo)記研究是進行分子標(biāo)記輔助選擇育種、分離和克隆基因的基礎(chǔ)?！笆濉逼陂g,我國科研工作者建立了適合黃瓜的RAPD、AFLP和SSR標(biāo)記的優(yōu)化反應(yīng)體系,并對黃瓜的多個基因進行了分子標(biāo)記。
錢忠英等[2]優(yōu)化的黃瓜RAPD反應(yīng)體系為:PCR程序94 ℃預(yù)變性3 min,94 ℃變性30 s,37 ℃復(fù)性30 s,72 ℃延伸2 min,循環(huán)40周,最后72 ℃延伸7 min為佳;模板DNA的適宜濃度為2.5～5 ng/μL,引物濃度為0.6 mol/μL,dNTPs濃度為0.25 mmol/L,Mg2+濃度為1.875 mmol/L。張桂華等[3]建立了適合黃瓜的AFLP反應(yīng)體系:在50μL酶切連接體系中,取300 ng基因組DNA進行雙酶切和接頭連接,然后取4μL酶切連接產(chǎn)物進行預(yù)擴增,預(yù)擴增產(chǎn)物稀釋30倍后,采用“2+3”選擇性擴增引物組合用于選擇性擴增可以得到很好的擴增效果。葛風(fēng)偉[4]等摸索了適宜黃瓜的SSR反應(yīng)體系,認為在25Μl PCR反應(yīng)體系中,Mg2+的最適濃度為0.2 mmol/L;dNTP最適濃度為0.2 mmol/L;反應(yīng)體系中Taq聚合酶宜加入1U,引物應(yīng)加入30 ng;DNA最適濃度為5 ng/μL。另外,劉殿林[5]、張正奇[6]、孫敏[7]等也對黃瓜基因組DNA提取方法和RAPD反應(yīng)體系進行了探索。
基因分子標(biāo)記方面,陳勁楓等[8]利用RAPD技術(shù)獲得了黃瓜全雌性特異的片段B111000。婁群峰等[9]篩選得到了與黃瓜全雌性F基因連鎖距離為6.7 cM的AFLP標(biāo)記TG/CAC234,并將該標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記SA166。張桂華等[10]找到2個與白粉病抗病相關(guān)基因連鎖距離為5.56 cM的AFLP標(biāo)記,目標(biāo)片段的大小分別為238 bp和236 bp。張素勤等[11]研究并獲得了與控制黃瓜霜霉病和白粉病的感病QTLs均緊密連鎖的顯性AFLP標(biāo)記:E25M632-103。該標(biāo)記從分子水平說明黃瓜霜霉病和白粉病的某個感病QTLs是連鎖的。丁國華[12]篩選得到與抗霜霉病基因dm連鎖不十分密切的CsRGA3標(biāo)記。在dm和CsRGA3之間還檢測到黃瓜白粉病抗病基因pm的存在,顯示了dm和pm存在連鎖關(guān)系。國艷梅[13]篩選到的AFLP標(biāo)記E4M6和E5M5,分別與黃瓜營養(yǎng)部分苦味基因Bi連鎖,距離15.0 cM;和不苦基因bi連鎖,距離18.8 cM。顧興芳等[14]找到了與黃瓜果實苦味基因Bt緊密連鎖的兩個顯性AFLP標(biāo)記E23M662-101和E25M652-213,與Bt的遺傳距離分別為5 cM和4 cM,且位于Bt兩側(cè)。Thomas等[15]以WⅡ983G×Strait8的55個F2+代個體和Iudm1×Strait8的90個F2+代為研究群體,從960對RAPD引物產(chǎn)生的135個多態(tài)性標(biāo)記中篩選出5個與黃瓜霜霉病基因(dm)緊密連鎖的標(biāo)記:G14-800、X15-1100、AS5-800、BC519-1100和BC526-1000。
2.2黃瓜遺傳圖譜的構(gòu)建與基因定位
1994年,Kennard等[16]以G421×H-19獲得的F2+群體為材料,構(gòu)建了一張總長為766 cM的遺傳圖譜,該圖譜由10個連鎖群組成,包含了58個位點標(biāo)記,2個位點之間的平均距離為(21±8)cM。同時利用種間雜交GY14×PⅡ83967獲得F2+群體構(gòu)建了含有70個位點,10個連鎖組群,總長480 cM的連鎖圖譜。1997年,Serquen等[17]以G421×H219雜交的100個F2+株系為試材利用RAPD技術(shù)構(gòu)建了一個含有80個位點的連鎖圖譜,包含了77個RAPD標(biāo)記,3個形態(tài)標(biāo)記,分為9個連鎖組群,整合長度628 cM,平均標(biāo)記間隔7.8 cM。
2000年,Danin-Poleg等[18]以GY14×PⅡ83967為材料,用SSR標(biāo)記技術(shù)構(gòu)建了黃瓜的遺傳圖譜,將14個SSR標(biāo)記定位到8個連鎖組群中,整合圖譜總長為783.2 cM,并發(fā)現(xiàn)其中有9個標(biāo)記與甜瓜相同。Bradeen等[19]利用Joinmap軟件,以G421×H219的雜交后代群體為研究對象,整合出含有10個連鎖群,255個標(biāo)記,總長為538.6 cM的遺傳圖譜,平均標(biāo)記間隔為2.3 cM。又以GY14×PⅡ83967為材料,構(gòu)建了一張包括了15個連鎖組群,197個標(biāo)記,整合圖譜長度為450.1 cM的黃瓜遺傳圖譜。Park等[20]利用對番木瓜環(huán)斑病毒(PRSV-W)和南瓜花葉病毒(ZYMV)敏感的“Straight8”和對PRSV-W、ZYMV有抗性的TMG1(TaichungMouGua)的F6代重組自交系(RLs)為材料,構(gòu)建了包含353個位點,12個連鎖組群的連鎖圖譜。Fazio等[21]采用G421×H219獲得的171個RLs和216個F2+單株構(gòu)建了包含14個SSR標(biāo)記、24個SCAR標(biāo)記、27個AFLP標(biāo)記、62個RAPD標(biāo)記、1個SNP標(biāo)記和3個重要形態(tài)學(xué)標(biāo)記(雌性,有限生長和小葉),分為7個連鎖組群,總長為706 cM的遺傳圖譜。Young等[22]以黃瓜抗病毒和感病毒的親本組成的重組自交系進行AFLP、RAPD、RFLP標(biāo)記,并構(gòu)建了353個位點的黃瓜圖譜。
“十五”期間,我國科研工作者構(gòu)建了2張黃瓜遺傳圖譜,其一是張海英等[23]利用黃瓜重組自交系為作圖群體,構(gòu)建的包含9個連鎖組群,共有234個分子標(biāo)記的連鎖圖譜,其中包括141個AFLP標(biāo)記、4個SSR標(biāo)記和89個RAPD標(biāo)記,覆蓋基因組長度727.5 cM,平均圖距3.1 cM。應(yīng)用該圖譜對控制黃瓜耐弱光的數(shù)量性狀基因(QTL)進行了研究,將影響葉面積增長量的5個QTL分別定位在LG1、LG7和LG9連鎖群[24]。其二為李效尊等[25]利用F2+代群體,構(gòu)建的包含77個SRAP標(biāo)記和79個RAPD標(biāo)記的遺傳圖譜,分屬4個大的連鎖群和5個小的連鎖群,總長度1110.0 cM,平均間距為13.7 cM。并將側(cè)枝基因(lb)定位在一個大的連鎖群上,其兩側(cè)標(biāo)記是OP-Q5-1和OP-M-2-2,與lb的間距分別是9.3 cM和15.9 cM;將全雌性基因(f)定位在一個小的連鎖群上,其兩側(cè)標(biāo)記是OP-Q5-2和BC151,與f的間距分別是13.8 cM和13.6 cM。
2.3分子標(biāo)記在黃瓜親緣關(guān)系和遺傳多樣性上的研究
分子標(biāo)記技術(shù)以其準(zhǔn)確性高、速度快、周期短而較多地應(yīng)用于黃瓜種質(zhì)親緣關(guān)系分析和種質(zhì)資源多樣性檢測方面。利用RAPD標(biāo)記進行研究的報道有:張海英等[26]分析了華北型與歐洲溫室型品種的雜交后代的遺傳漂移情況,進行了初步的遺傳分析以及F2+個體的基因型分析。劉殿林等[27]分析了39份黃瓜材料的遺傳差異,不同材料間的遺傳距離(D)在0.0642～0.592之間,并根據(jù)遺傳距離,按UWPGA法進行了聚類分析。夏立新等[28]計算出黃瓜親本間分子遺傳距離,研究了田間園藝性狀與分子遺傳距離間各種相關(guān)曲線的相關(guān)系數(shù)。陳勁楓等[29]對黃瓜屬的22份材料的親緣關(guān)系進行了研究,聚類分析為2群:CS群(黃瓜、西南野黃瓜及野黃瓜)和CM群(甜瓜、菜瓜、野生小黃瓜及非洲角黃瓜)。莊飛云等[30]也將23份材料按親緣關(guān)系聚類為黃瓜、近緣野生種、種間雜交種和甜瓜亞屬種4類。李錫香等[31]分析了66份黃瓜種質(zhì)基因組DNA,將供試種質(zhì)分為8個組群。另外,利用RAPD標(biāo)記可以從分子水平上探測黃瓜親本自交系與其雜種F1代的遺傳差異[32]。
AFLP技術(shù)也經(jīng)常用在親緣關(guān)系和遺傳多樣性研究上面。王志峰等[33]利用AFLP技術(shù)對包括80份山東黃瓜地方品種和24份其他地區(qū)品種的遺傳親緣關(guān)系進行了研究,聚類分析結(jié)果顯示:山東黃瓜地方品種與日本品種和歐美品種分屬不同類群或亞類群,山東地方品種分為8組,各組內(nèi)生態(tài)類型基本一致。AFLP分析計算出15份密刺類黃瓜品種的遺傳距離在0.033～0.686之間,聚類分析分為8類,新泰密刺和山東密刺遺傳差異較小,與長春密刺遺傳差異較大[34]。李錫香等[35]以8對引物對70份不同來源的野生和栽培黃瓜種質(zhì)基因組DNA進行AFLP分析,將供試種質(zhì)聚類為3大種群:西雙版納黃瓜組群、印度野生黃瓜組群和栽培黃瓜組群。Zhuang等[36]用RAPD和SSR分析黃瓜野生種、半野生種的親緣關(guān)系,二者的遺傳分析結(jié)果具有很高的協(xié)調(diào)性,二者遺傳距離的相關(guān)系數(shù)為0.94。
另外,李俊英等[37]發(fā)現(xiàn)在不同黃瓜品種的線粒體中存在類質(zhì)粒分布的差異,其存在有一定隨機性,不同品種中的同一種類質(zhì)粒間具有同源性。
2.4黃瓜基因的克隆與表達
黃瓜基因克隆有多篇報道?？祰蟮萚38]克隆得到了在黃瓜冷敏型品種低溫鍛煉異表達基因的cDN段(ccr18),大小為639 bp。在基因組中以單拷貝或低拷貝形式存在。ccr18基因與黃瓜低溫鍛煉相關(guān),與擬南芥染色體IIIBAC庫中的F14P3基因組序列具有88 %的同源性。白吉剛等[39]擴增出黃瓜生長素結(jié)合蛋白基因(ABPl)cDN段,大小約為800 bp,該基因在開花前1 d的子房中表達信號較弱,在授粉后2 d、4 d和6 d的幼果中表達增強。丁國華等[40]利用簡并引物從黃瓜基因組DNA中分離得到15條同時具有特征保守域結(jié)構(gòu)的NBS類型抗病基因同源序列(RGA),翻譯產(chǎn)物與許多抗病蛋白有較高的同源性。
牛林海[41]克隆了黃瓜HMG(high mobility group proteins)基因,并認為該基因是單拷貝,具有組織特異性表達,在根中表達最強。葉青靜[42]測定了黃瓜果實組織中的與細胞分裂相關(guān)的精氨酸脫羧酶(ADC)基因cDNA序列(約1.83 kb)、與細胞膨大有關(guān)的擴張蛋白基因cDNA序列(約786 bp)以及一條酸性轉(zhuǎn)化酶的cDNA全長序列(約2.25 kb)。李志英[43]獲得了正常和“花打頂”黃瓜之間的2個差異片段所在基因的全長cDNA序列,分別定名為CUATP和CuADC?！盎ù蝽敗敝仓曛蠧UATP的表達明顯減少,而CuADC表達量增加。梅茜[44]構(gòu)建了黃瓜幼果的cDNA文庫,得到139個表達序列標(biāo)簽(ESTs),其中有97條與已知基因高度相似,36條為低度相似序列,在GenBank中未找到匹配同源序列的ESTs為6個。婁群峰[45]從中國弱雌性黃瓜中克隆出了全長為1024 bp的ACC合酶基因,包含6個開放閱讀框,不同生態(tài)型黃瓜中ACC合酶基因序列保守性很強。不具有性型特異性,但在植株不同部位表達程度存在明顯差異。
2.5黃瓜雜種純度及品種指紋圖譜分析
黃瓜種子純度鑒定的常規(guī)方法是根據(jù)田間表現(xiàn)性狀進行鑒定,后來發(fā)展為利用同工酶的方法,但二者都有一定的缺陷。利用分子標(biāo)記技術(shù)鑒定黃瓜種子純度,可以在苗期甚至種子階段進行,高效快速、穩(wěn)定可靠?？朔藗鹘y(tǒng)田間檢驗要根據(jù)植株園藝性狀進行而導(dǎo)致的費時、費力等缺點。但相關(guān)報道比較少。
王和勇[46]研究表明,黃瓜不同組織器官的DNA對RAPD擴增無影響,均可獲得一致的指紋圖譜,并建立了種子純度鑒定的RAPD的反應(yīng)體系。孫敏[47]等通過RAPD標(biāo)記鑒定和分析了黃瓜品種真實性,也建立了適宜黃瓜種子純度鑒定的RAPD指紋圖譜。金紅等[48]研究了抗除草劑基因在黃瓜雜種純度快速鑒定上的應(yīng)用,摸索出田間抗性鑒定和室內(nèi)種子抗性鑒定的除草劑臨界濃度,建立了一套在種子發(fā)芽階段或2片真葉期進行黃瓜雜交種純度鑒定的新技術(shù)。
2.6分子技術(shù)鑒定黃瓜病害
王惠哲等[49]以感病組織和健康組織總RNA為模板,進行cDNA合成和PCR擴增,對75份黃瓜病毒病樣本進行了檢測,結(jié)果從感病組織中擴增出與預(yù)期的425 bp大小一致的目標(biāo)片段,而健康組織無此擴增產(chǎn)物;29份材料檢測到TMV,檢出率達38.67 %。同樣的方法,也檢測到黃瓜上的西瓜花葉病毒2號(WMV22)[50]。李淑菊等[51]利用RT-PCR對黃瓜病毒毒原種類進行檢測。陳潔云等[52]用同樣技術(shù)明確了ZYMV和CMV是浙江及其周邊地區(qū)侵染葫蘆科植物最主要的病毒種類,夏季CMV普遍發(fā)生,ZYMV主要發(fā)生在秋季。
3黃瓜組培技術(shù)與單倍體和三倍體培養(yǎng)
利用對黃瓜離體組織的培養(yǎng),通過愈傷組織和胚狀體兩條途徑均可獲得再生植株。何曉明等[53]建立了子葉及下胚軸離體培養(yǎng)體系,通過愈傷組織分化出的不定芽獲得再生植株。郭德章等[54]將分離純化的黃瓜子葉原生質(zhì)體,培養(yǎng)于mKM8p液體培養(yǎng)基中,原生質(zhì)體可持續(xù)分裂至愈傷組織形成。當(dāng)再生的愈傷組織直徑達0.5～1.5 cm時,及時轉(zhuǎn)入改良的MS附加不同生長激素的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)分化及再生,結(jié)果產(chǎn)生大量體胚并再生成植株。
不少報道對黃瓜組織培養(yǎng)的影響因素做了探討。侯愛菊等[55]認為外植體類型、基因型及植物生長調(diào)節(jié)劑對誘導(dǎo)黃瓜直接器官發(fā)生有顯著影響,子葉節(jié)是最佳的外植體類型。楊愛馥等[56]研究認為愈傷組織誘導(dǎo)階段和胚胎發(fā)生階段分別采用9 %和6 %的蔗糖濃度,可促進體細胞胚胎發(fā)生;胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加6-BA 0.5 mg/L,以及愈傷組織誘導(dǎo)階段甘露醇與蔗糖配合使用,可提高體細胞胚胎發(fā)生率。梅茜等[57]研究表明,苗齡和ABA是影響子葉分化形成不定芽的顯著因素;加入適量的AgNO3可改善黃瓜愈傷組織的質(zhì)地、促進芽的形成。與曹利仙等[58]試驗結(jié)果相同。郭德章等[54]認為Ca2+濃度對黃瓜原生質(zhì)體的穩(wěn)定和細胞分裂有重要影響。李云等[59]研究后認為赤霉素處理離體黃瓜子葉不能誘導(dǎo)花芽分化,萘乙酸的促進作用不明顯,激動素KT1.0誘導(dǎo)花芽分化的頻率最高。但周俊輝等[60]認為l/2 MS培養(yǎng)基中附加0.10 mg/L 6-BA能顯著提高離體黃瓜子葉的開花率,White培養(yǎng)基中附加2.00 mg/L的KT開花率也有明顯提高。相同濃度的L-丙氨酸和L-酪氨酸均明顯促進黃瓜子葉開花,而甘氨酸對黃瓜子葉開花則有一定的抑制。
在黃瓜單倍體和多倍體培養(yǎng)方面,杜勝利等[61]在國內(nèi)首次建立了一整套通過未受房離體培養(yǎng)產(chǎn)生黃瓜單倍體植株的技術(shù)體系,再生頻率達25 %。雷春等[62]通過射線輻射花粉授粉并結(jié)合胚培養(yǎng)從3個基因型中獲得了單倍體植株。陳勁楓等[63]研究了異源三倍體黃瓜的離體繁殖的培養(yǎng)基配方最佳的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS + 6-BA 2.2 mg/L和MS + 3.0 mg/L KT + 0.2 mg/L NAA,然后叢生芽在MS + 0.2 mg/L 6-BA的培養(yǎng)基上伸長大約10 d后取整齊一致的芽在1/2 MS + 0.2 mg/L 6-BA培養(yǎng)基上生根。
4黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化體系建立及基因工程改良
基因工程技術(shù)是現(xiàn)代生物技術(shù)改良作物品種的關(guān)鍵技術(shù)之一,在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中有著廣泛的應(yīng)用前景?？蓱?yīng)用于黃瓜上的轉(zhuǎn)基因方法有農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、基因槍法、花粉管通道法和電激法等,目前以農(nóng)桿菌介導(dǎo)法為主要方法。近幾年來,廣大科研工作者研究和建立了黃瓜高效遺傳轉(zhuǎn)化體系,并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)將CMV-CP、CBF3、Cor15A、Chi、Glu、CTB/CS3、RS等基因?qū)朦S瓜基因組。
陳崢等[64]的研究表明,在共培養(yǎng)的菌液中添加乙酰丁香酮,明顯提高外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率;延長農(nóng)桿菌與外植體的共浸染時間至40 min,外植體的存活率和出芽率顯著提高。姚春娜等[65]試驗表明,超聲波處理可以明顯提高農(nóng)桿菌對外植體的轉(zhuǎn)化頻率。侯愛菊等[66]建立了一套黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化體系,適宜的選擇壓力為卡那霉素30 mg/L。金紅等[67]也對影響遺傳轉(zhuǎn)化體系的因素進行了摸索。于靜[68]、孫蘭英[69]、趙雋等[70]均認為子葉節(jié)是黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化體系的最佳外植體,最適宜的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS + 6-BA 0.5 mg/L;子葉節(jié)預(yù)培養(yǎng)1～2 d,在添加6-BA 0.5 mg/L、乙酰丁香酮100μmo1/L,pH 5.2的MS培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),遺傳轉(zhuǎn)化效率最高。利用TDZ從子葉節(jié)上誘導(dǎo)出再生芽,效果優(yōu)于BA。
金紅等[67]將抗除草劑基因bar導(dǎo)入到黃瓜子葉中,獲得落地轉(zhuǎn)化株系。鄧小燕等[71]構(gòu)建成植物表達載體Pbinp-35S-CBF3。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化黃瓜子葉,獲得了具有卡那霉素抗性的黃瓜再生植株。張興國[72]等也將冷cbf3基因和corl5a抗寒基因?qū)朦S瓜基因組,創(chuàng)制出耐寒黃瓜新材料。白吉剛等[73,74]將擬南芥生長素結(jié)合蛋白基因轉(zhuǎn)化黃瓜,獲得的轉(zhuǎn)基因植株單性結(jié)實能力增強。通過黃瓜離體子葉不定芽再生體系,陳麗梅[75]和林建麗[76]已分別將熒光素基因(luc)、ATT1基因和花生白黎蘆醇合酶(RS)基因?qū)朦S瓜,獲得了陽性轉(zhuǎn)基因植株。柏錫[77]獲得了轉(zhuǎn)組織型纖溶酶原激活劑基因的黃瓜植株。張國廣[78]將來源于菜豆的幾丁質(zhì)酶(Chi)基因和克隆自煙草的β-1,3-葡聚糖酶(Glu)基因?qū)?個基因型的黃瓜基因組中。侯愛菊[66]、孫蘭英[69]和楊成德[79]也利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將菜豆幾丁質(zhì)酶基因?qū)朦S瓜。
5存在問題及展望
黃瓜有7對染色體,染色體組總長度750～1 000 cM,高飽和的分子連鎖圖應(yīng)具有7個連鎖群。目前構(gòu)建的遺傳圖譜相對不飽和,整合后的連鎖圖譜雖然密度增加,但是不能覆蓋整個基因組。被定位到圖譜上的分子標(biāo)記不多,與重要性狀緊密連鎖的標(biāo)記就更少。因此,仍需對黃瓜分子標(biāo)記進行研究,找到與性狀緊密連鎖的標(biāo)記,為分子標(biāo)記輔助育種和基因的定位克隆奠定基礎(chǔ)。黃瓜組織培養(yǎng)以二倍體的研究居多,單倍體和多倍體的研究較少,黃瓜單倍體組織培養(yǎng)的技術(shù)在國內(nèi)仍未成熟,黃瓜轉(zhuǎn)基因技術(shù)也還停留在研究階段,與實際應(yīng)用還有相當(dāng)差距,今后尚需進一步研究。
參考文獻
[1] 姜健.生物技術(shù)在農(nóng)業(yè)發(fā)展中的應(yīng)用[J].農(nóng)業(yè)與技術(shù),1999,19(3):8-11.
[2] 錢忠英,蔡潤,潘俊松,等.黃瓜RAPD體系的優(yōu)化與應(yīng)用[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)科學(xué)版),2003,21(3):208-213.
[3] 張桂華,杜勝利,鞠秀芝,等.黃瓜AFLP反應(yīng)體系的建立[J].華北農(nóng)學(xué)報,2004,19(2):10-12.
[4] 葛風(fēng)偉,張海英,陳青君,等.黃瓜SSR反應(yīng)體系的建立[J].華北農(nóng)學(xué)報,2004,19(2):5-9.
[5] 劉殿林,楊瑞環(huán),哈玉潔,等.黃瓜基因組DNA提取與RAPD分析[J].華北農(nóng)學(xué)報,2002,17(4):9-12.
[6] 張正奇,鄒敏芬,熊勁芳,等.黃瓜DNA的提取研究[J].湖南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2003,30(6):31-33.
[7] 孫敏,喬愛民,王和勇,等.黃瓜DNA提取及其RAPD-PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化[J].種子,2004,23(6):9-14.
[8] 陳勁楓,婁群峰,余紀柱,等.黃瓜性別基因連鎖的分子標(biāo)記篩選[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報,2003,19(4):11-14.
[9] 婁群峰,陳勁楓,MollyJahn,等.黃瓜全雌性基因連鎖的AFLP和SCAR分子標(biāo)記[J].園藝學(xué)報,2005,32(2):256-261.
[10] 張桂華,杜勝利,王鳴,等.與黃瓜抗白粉病相關(guān)基因連鎖的AFLP標(biāo)記的獲得[J].園藝學(xué)報,2004,31(2):189-192.
[11] 張素勤.黃瓜霜霉病和白粉病抗性遺傳機制及其分子標(biāo)記研究(博士畢業(yè)論文).2005.
[12] 丁國華.黃瓜抗病基因同源序列的克隆及其對霜霉病抗病基因標(biāo)記的研究(博士畢業(yè)論文).2004.
[13] 國艷梅.黃瓜苦味遺傳規(guī)律研究及AFLP分子標(biāo)記(碩士畢業(yè)論文).2003.
[14] 顧興芳,張素勤,張圣平,等.黃瓜果實苦味Bt基因的AFLP分子標(biāo)記[J].園藝學(xué)報,2006,33(1):140-142.
[15] Thomas H,Staub J E,Claude Thomas.Linkage of random amplified polymorphic DNA marker stodowny mildew resistance in cucumber (CucumissativusL.)[J].Euphytica,2000,115:105-113.
[16] Kennard W K,Poetter K,DIjkhuIzen A,et al.Linkage samong RFLP,RAPD,isozyme,disease-resistance and morphological marker sinnarrow and wide crosses of cucumber[J].TheorAppl.Genet,1994,89:42-48.2.
[17] Serquen F C,Bacher J,Staub J E.Mapping and QTL analysis of horticultural trait sinanarrow cross in cucumber(CucumissativusL.)using random 2 amplified polymorphic DNA markers[J].MolecularBreeding,1997,3:257-268.
[18] Danin-Poleg Y,Reisn,Baudracco-Arnas S.Simples equecerepeats in Cucumism apping and mapmerging[J].Genome,2000,43:963-974.
[19] Bradeen J E,Staub C,Wye C.Toward sanexpande dandinte grated linkagemap of cucumber(CucumissativusL.)[J].Genome,2001,44:111-119.
[20] Park Y H,Swnsoy S,Wye C,etal.Agenetic map of cucumber composed of RAPDs,RFLPs,AFLPs, and lociconditioning resistance topapayaring spot and zucchini yellow mosaic viruses[J].Genome,2000,43(6):1003-1010.
[21] Fazd G,Staub J E,Srevensm R.Genetic mapping and QTL analysis of horticultural traits in cucumber(CucumissativusL.)[J].Theor.Appl.Genet.,2003,107(5):864-874.
[22] Young H P,Suat S,Cispin W,et al.Agenetic map of cucumber composed of RAPDs,RFLPs,AFLPs and locicondition[J].Genome,2000,43:1003-1010.
[23] 張海英,葛風(fēng)偉,王永健,等.黃瓜分子遺傳圖譜的構(gòu)建[J].園藝學(xué)報,2004,31(5):617-622.
[24] 張海英,陳青君,王永健,等.黃瓜耐弱光性狀的QTL定位[J].分子植物育種,2004,2(6):795-799.
[25] 李效尊,潘俊松,王剛,等.黃瓜側(cè)枝基因(lb)和全雌基因(f)的定位及RAPD遺傳圖譜的構(gòu)建[J].自然科學(xué)選展,2004,14(11):1225-1229.
[26] 張海英,王永健,許勇,等.黃瓜育種中“血緣”遺傳關(guān)系分析研究[J].華北農(nóng)學(xué)報,2001,16(2):20-26.
[27] 劉殿林,楊瑞環(huán),哈玉潔,等.不同來源黃瓜遺傳親緣關(guān)系的RAPD分析[J].華北農(nóng)學(xué)報,2003,18(3):50-54.
[28] 夏立新,陳德富,等.黃瓜親本間分子遺傳距離與雜種優(yōu)勢的相關(guān)性[J].南開大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)),2001,34(2):91-94.
[29] 陳勁楓,莊飛云,逯明輝,等.采用SSR和RAPD標(biāo)記研究黃瓜屬(葫蘆科)的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系[J].植物分類學(xué)報,2003,41(5):427-435.
[30] 莊飛云,陳勁楓.黃瓜栽培種、近緣野生種、種間雜種及其回交后代的RAPD分析[J].園藝學(xué)報,2003,30(1):47-50.
[31] 李錫香,蔚,杜永臣,等.黃瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性的RAPD鑒定與分類研究[J].植物遺傳資源學(xué)報.2004,5(2):147-152.
[32] 齊秀麗.黃瓜自交系及其F1代的RAPD分析(碩士畢業(yè)論文).2003.
[33] 王志峰,孫日飛,孫小鐳,等.山東省黃瓜地方品種資源親緣關(guān)系的AFLP分析[J].園藝學(xué)報,2004,31(1):103-105.
[34] 王志峰,孫小鐳,孫日飛,等.山東密刺類黃瓜親緣關(guān)系研究[J].中國蔬菜,2005(2):6-8.
[35] 李錫香,蔚,杜永臣,等.黃瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性及其親緣關(guān)系的AFLP分析[J].園藝學(xué)報,2004,31(3):309-314.
[36] Zhuang F Y,Chen J F.Assessment of genetic relationship samong Cucumisspp.by SSR and RAPD marker analysis[J].Plant Breeding,2004,123:167-172.
[37] 李俊英,聞穎達.黃瓜線粒體類質(zhì)粒pC1,pC4在品種間的分布及同源性研究遺傳[J].科學(xué)通報,2001,28(4):367-371.
[38] 康國斌,許勇,雍偉東,等.低溫誘導(dǎo)的黃瓜ccr18基因的cDNA克隆及其表達特性分析[J].植物學(xué)報2001,43(9):955-959.
[39] 白吉剛,劉佩瑛,等.黃瓜生長素結(jié)合蛋白cDN段的克隆及其表達[J].植物生理與分子生物學(xué)學(xué)報,2002,28(3):200-204.
[40] 丁國華,秦智偉,劉宏宇,等.黃瓜NBS類型抗病基因同源序列的克隆與分析[J].園藝學(xué)報,2005,32(4):638-642.
[41] 牛林海.裂葉牽牛、玉米和黃瓜HMG基因的克隆及功能分析(碩士畢業(yè)論文).2002.
[42] 葉青靜.黃瓜果實發(fā)育相關(guān)基因的克隆及其表達調(diào)控的研究(碩士畢業(yè)論文).2003.
[43] 李志英.黃瓜“花打頂”形態(tài)、解剖、細胞學(xué)特征及相關(guān)基因的分離與鑒定(博士畢業(yè)論文).2003.
[44] 梅茜.黃瓜幼果cDNA文庫構(gòu)建與部分ESTs分析(碩士畢業(yè)論文).2004.
[45] 婁群峰.黃瓜全雌性基因分子標(biāo)記及ACC合酶基因的克隆與表達研究(博士畢業(yè)論文).2004.
[46] 王和勇.黃瓜雜交種子純度的RAPD鑒定(碩士畢業(yè)論文).2001.
[47] 孫敏,喬愛民,王和勇,等.黃瓜雜交種子純度的RAPD鑒定[J].西南師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2003,28(2):103-107.
[48] 金紅,杜勝利,陳崢,等.抗除草劑基因在黃瓜雜種純度快速鑒定上的應(yīng)用研究[J].華北農(nóng)學(xué)報,2004,19(3):31-34.
[49] 王惠哲,李淑菊,龐金安,等.黃瓜上煙草花葉病毒的RT-PCR檢測[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué),2004,10(2):11-13.
[50] 王惠哲,李淑菊,霍振榮,等.利用RT-PCR檢測黃瓜上的西瓜花葉病毒[J].天津農(nóng)學(xué)院學(xué)報,2004,11(4):20-22.
[51] 李淑菊,王惠哲,霍振榮,等.利用RT-PCR對黃瓜病毒病毒原種類進行檢測[J].華北農(nóng)學(xué)報,2004,19(3):100-102.
[52] 陳潔云.兩種葫蘆科病毒的分子檢測和致病性研究[J].植物病理學(xué)報,2003,33(5):449-455.
[53] 何曉明,林毓娥.黃瓜子葉和下胚軸的離體培養(yǎng)[J].植物生理學(xué)通訊,2001,37(5):423-424.
[54] 郭德章,鄢錚,賴鐘雄,等.‘翠秀’黃瓜子葉原生質(zhì)體的高效培養(yǎng)及植株再生[J].園藝學(xué)報,2003,30(2):227-228.
[55] 侯愛菊,朱延明,楊愛馥,等.誘導(dǎo)黃瓜直接器官發(fā)生主要影響因素的研究[J].園藝學(xué)報,2003,30(1):101-103.
[56] 楊愛馥,朱延明,侯愛菊.幾個影響黃瓜子葉體細胞胚胎發(fā)生的因素[J].植物生理學(xué)通訊,2003,39(3):206-208.
[57] 梅茜,張興國.黃瓜組織培養(yǎng)研究[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2002,24(3):266-267.
[58] 曹利仙,趙鸝,唐宇力,等.硝酸銀對黃瓜離體子葉培養(yǎng)芽再生的促進效應(yīng)[J].甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2001,36(2):168-171.
[59] 李云,鄢洪強,李林,等.離體培養(yǎng)黃瓜子葉花芽分化研究[J].內(nèi)江師范學(xué)院學(xué)報,2004,19(6):86-88.
[60] 周俊輝,周家容,林畢成,等.6-BA和氨基酸對黃瓜子葉離體培養(yǎng)成花的影響[J].植物生理學(xué)通訊,2004,40(2):171-173.
[61] 杜勝利,魏愛民,魏惠軍,等.利用生物技術(shù)創(chuàng)造黃瓜育種新材料方法研究[J].天津科技,2001,(2):627.
[62] 雷春,陳勁楓,錢春桃,等.輻射花粉授粉和胚培養(yǎng)誘導(dǎo)產(chǎn)生黃瓜單倍體植株[J].西北植物學(xué)報,2004,24(9):1739-1743.
[63] 陳勁楓,羅向東,余紀柱,等.異源三倍體黃瓜的離體繁殖和鑒定[J].植物生理學(xué)通訊,2003,39(2):109-112.
[64] 陳崢,金紅,程奕,等.提高黃瓜農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化體系再生頻率的研究[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué),2001,7(4):47-49.
[65] 姚春娜,王亞馥.超聲波輔助發(fā)根農(nóng)桿菌對黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化的影響[J].園藝學(xué)報,2001,28(1):80-82.
[66] 侯愛菊.黃瓜抗真菌基因遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究(碩士畢業(yè)論文).2001.
[67] 金紅,杜勝利,陳崢,等.抗除草劑轉(zhuǎn)基因黃瓜的獲得及T_1植株抗性鑒定[J].華北農(nóng)學(xué)報,2003,18(1):44-46.
[68] 于靜.CTB/CS3基因表達載體構(gòu)建及對黃瓜的轉(zhuǎn)化(碩士畢業(yè)論文).2003.
[69] 孫蘭英.幾丁質(zhì)酶基因?qū)S瓜遺傳轉(zhuǎn)化的研究(碩士畢業(yè)論文).2003
[70] 趙雋,王華,潘俊松,等.黃瓜子葉節(jié)離體再生體系的研究[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)科學(xué)版),2004,22(1):43-48.
[71] 鄧小燕,張興國,井鑫,等.冷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子基因CBF3轉(zhuǎn)化黃瓜的研究[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2004,26(5):603-605.
[72] 張興國,邵長文,等.基因Cor15A和CBF3導(dǎo)入黃瓜基因組[J].蔬菜分子育種研討會論文集,2004.
[73] 白吉剛,宋明,劉佩瑛,等.生長素結(jié)合蛋白cDNA的克隆及其在黃瓜中的表達[J].植物學(xué)通報,2002,19(6):705-709.
[74] 白吉剛,王秀娟,尹謙遜,等.生長素結(jié)合蛋白基因轉(zhuǎn)化黃瓜的研究[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2004,37(2):263-267.
[75] 陳麗梅.黃瓜的高效再生和根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化(碩士畢業(yè)論文).2004.
[76] 林建麗.花生白黎蘆醇合酶基因表達載體構(gòu)建及黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化體系的初步研究(碩士畢業(yè)論文).2004.
[77] 柏錫.t2PA基因?qū)S瓜的遺傳轉(zhuǎn)化及其在不同植物中的表達效率分析和密碼子改造(碩士畢業(yè)論文).2003.
1.學(xué)術(shù)英語論文寫作的過程、挑戰(zhàn)與應(yīng)對策略
2.英語專業(yè)碩士畢業(yè)論文的語言錯誤分析研究
3.體裁分析與農(nóng)業(yè)英語論文摘要
4.英語論文摘要的語篇模式與作者介入——英語本科畢業(yè)論文摘要的實證研究
5.工科博士生英語科技論文寫作的主要問題及解決建議
6.中國市場營銷研究英語論文綜述——基于內(nèi)容及來源的描述分析
7.我國商務(wù)英語研究十年現(xiàn)狀分析(2002-2011)
8.英語專業(yè)學(xué)生撰寫英語論文常見錯誤評析
9.提高英語專業(yè)本科生畢業(yè)論文寫作能力的思考
10.我國英語專業(yè)碩士學(xué)位論文標(biāo)題的詞匯句法特征研究
11.中國商務(wù)英語研究：現(xiàn)狀與趨勢
12.中外應(yīng)用語言學(xué)類期刊論文英語題目對比分析
13.英語本科畢業(yè)論文寫作的動機研究及其啟示
14.中國大陸及香港地區(qū)學(xué)者國際期刊英語之對比研究
15.中外學(xué)者國際期刊英語學(xué)術(shù)論文摘要寫作的對比研究
16.基于可視化技術(shù)的國外商務(wù)英語研究進展考察(2002—2012)
17.基于語料庫的中國大陸與本族語學(xué)者英語科研論文模糊限制語比較研究——以國際期刊《納米技術(shù)》論文為例
18.基于語料庫的科技英語論文四詞詞簇特點研究
19.英語論文APA格式評介
20.英語專業(yè)本科畢業(yè)論文存在問題的分析和對策
21.英語專業(yè)學(xué)士論文寫作現(xiàn)狀分析
22.生物醫(yī)學(xué)英語論文的語言特征及寫作技巧
23.英語論文寫作與大學(xué)生創(chuàng)新思維能力的培養(yǎng)
24.大學(xué)生英語論文寫作的言據(jù)性研究
25.淺談英語論文如何選題
26.論項目驅(qū)動下研究生英語論文寫作能力的培養(yǎng)
27.中國作者與英語母語作者英語論文中的介入資源
28.二語能力背景與隱喻思維關(guān)系的研究——在學(xué)術(shù)英語論文答辯語境下對二語隱喻的實證研究
29.英語論文自動評分系統(tǒng)探索
30.英語論文寫作與語言學(xué)習(xí)效果的關(guān)系——一項基于研究生論文寫作過程的實證研究
31.英語論文MLA格式要求評介
32.非英語專業(yè)多學(xué)科大班博士生英語論文寫作教學(xué)模式初探
33.課程論視角下大學(xué)英語教學(xué)研究現(xiàn)狀調(diào)查與展望——基于國內(nèi)外語類核心期刊的論文分析(2004-2012)
34.語篇模式與大學(xué)生英語論文寫作
35.研究生英語論文中連接副詞使用情況調(diào)查
36.英語專業(yè)畢業(yè)論文規(guī)范操作思考——一次對全國112所高校英語專業(yè)本科畢業(yè)論文操作的調(diào)查
37.英語專業(yè)翻譯選題畢業(yè)論文的改革嘗試
38.英語學(xué)術(shù)論文寫作及構(gòu)建寫作過程模型
39.淺析英語論文摘要結(jié)構(gòu)要素之應(yīng)用
40.模糊限制語使用的歷時對比——以1990—1994年與2005—2009年英語醫(yī)學(xué)論文中模糊限制語使用為例
41.關(guān)于英語專業(yè)本科畢業(yè)論文選題的若干思考
42.基于語類的英語學(xué)術(shù)論文寫作教學(xué)路徑研究——以“文獻綜述”寫作教學(xué)為例
43.等離子體物理學(xué)英語論文的用詞與寫作特點
44.20世紀80年代以來的ERPP寫作研究：回顧與展望
45.英語論文MLA與APA格式中參考書目格式的異同比較
46.英語學(xué)術(shù)論文中轉(zhuǎn)述動詞的時態(tài)形式及其意義
47.中外學(xué)術(shù)語篇中的重述標(biāo)記比較研究
48.英語專業(yè)本科生畢業(yè)論文寫作存在的問題及其對策
49.從講座到工作坊——英語輔修專業(yè)論文寫作課的任務(wù)性和互動性
50.改進英語寫作教學(xué)提高畢業(yè)論文質(zhì)量
51.經(jīng)驗意義的構(gòu)建與語篇體裁：農(nóng)業(yè)英語論文摘要分析
52.語類意識與英語研究論文寫作
53.非英語專業(yè)研究生科技英語論文寫作過程中常見問題分析
54.英語論文寫作與發(fā)表之失誤例談(一)：語體
55.英語論文寫作教學(xué)實踐研究
56.“以寫促學(xué)”提高理工科博士生英語科技論文寫作能力
57.中國英語學(xué)者學(xué)術(shù)論文英文摘要寫作中的問題與出路
58.理工科英語科研論文“引言部分”研究空間構(gòu)建對比研究
59.模因論與英語論文寫作教學(xué)
60.英語科技論文摘要的寫作范式研究
61.大學(xué)英語聽力教學(xué)研究現(xiàn)狀與問題分析——基于國內(nèi)CSSCI期刊論文的分析(1994-2013)
62.英語專業(yè)本科生畢業(yè)論文的調(diào)查與思考
63.基于網(wǎng)絡(luò)學(xué)習(xí)生態(tài)系統(tǒng)的英語專業(yè)學(xué)位論文質(zhì)量監(jiān)控體系
64.英語專業(yè)語言學(xué)類碩士論文英語標(biāo)題的對比研究
65.科技英語論文編輯文字加工中的語態(tài)處理
66.中醫(yī)藥主題英語論文語言模式特點初探
67.經(jīng)驗意義的構(gòu)建與語篇體裁：農(nóng)業(yè)英語論文摘要分析
68.近30年國內(nèi)英語專業(yè)畢業(yè)論文寫作研究
69.醫(yī)學(xué)英語論文的撰寫中英、漢表達差異的探討
70.思維模式差異對英語學(xué)術(shù)論文寫作的影響及對策
71.中國學(xué)生英語專業(yè)碩士論文“前言”部分的語類結(jié)構(gòu)模式分析
72.科技英語論文中語態(tài)使用的對比分析
73.研究生英語科技論文寫作探究式學(xué)習(xí)體系的思考與構(gòu)建
74.研究生學(xué)術(shù)英語需求分析
75.加拿大英語專業(yè)博士課程設(shè)置、學(xué)位論文評估對我國外語專業(yè)博士生學(xué)術(shù)能力發(fā)展的啟示
76.英語醫(yī)學(xué)論文寫作模式分析
77.英語學(xué)術(shù)論文寫作能力的構(gòu)成與培養(yǎng)
78.SCI醫(yī)學(xué)英語論文寫作格式和技巧
79.過程寫作法在IMRAD醫(yī)學(xué)英語論文寫作教學(xué)中的應(yīng)用
80.本科英語專業(yè)文學(xué)論文的選題
81.研究生英語科技論文寫作能力培養(yǎng)的探索與實踐
82.科技英語論文寫作原則
83.再談英語論文寫作規(guī)范
84.“過程”與“體裁”的良性互動——過程體裁教學(xué)法在《英語論文寫作》教學(xué)中的可行性論證
85.模因論視角下的英語論文寫作研究
86.英語專業(yè)畢業(yè)論文存在的問題及對策
87.模糊限制語的分類及其語用交際功能——基于科技英語論文視角
88.學(xué)術(shù)論文體裁教學(xué)不可或缺——英語專業(yè)碩士學(xué)位論文引言寫作情況調(diào)查
89.英語專業(yè)本科畢業(yè)論文寫作創(chuàng)新教育策略探究
90.中國學(xué)習(xí)者英語學(xué)術(shù)論文手稿中立場標(biāo)記詞塊使用研究
91.基于VBA的英語論文文獻自動生成工具
92.英語元話語在學(xué)術(shù)論文摘要寫作中的應(yīng)用
93.英語論文寫作研究——以“易得”論文寫作軟件專家系統(tǒng)為案例
94.語料庫驅(qū)動的科技英語論文詞束研究
95.淺談化學(xué)專業(yè)英語論文寫作
96.人際意義的創(chuàng)建與維系——研究生英語科技論文的互動問題研究
97.修辭結(jié)構(gòu)理論視角下英漢學(xué)術(shù)論文摘要的修辭關(guān)系對比研究
98.英語科技論文中的模糊限制語
