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[中圖分類號(hào)] R197 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B [文章編號(hào)] 1005-0515（2010）-12-205-01
血液標(biāo)本是檢驗(yàn)科最常見的標(biāo)本之一。在血細(xì)胞分析過(guò)程中，血液中可能存在的細(xì)菌、病毒、真菌及寄生蟲等病原體對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境及操作人員而言是潛在的危害。本文就血液實(shí)驗(yàn)室潛在的生物安全危害及安全防護(hù)措施報(bào)告如下。
1 檢驗(yàn)人員基本安全防護(hù)
檢驗(yàn)人員應(yīng)提高生物安全防范意識(shí)，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室污染區(qū)后要穿工作服及專用鞋。血液標(biāo)本中可能存在各種病原體，檢驗(yàn)人員在接觸標(biāo)本的過(guò)程中應(yīng)戴手套，且戴手套后不應(yīng)再接觸清潔表面。當(dāng)手套破損后，手被血液污染時(shí)應(yīng)立即洗手。在進(jìn)行可能產(chǎn)生氣溶膠的操作時(shí)，需進(jìn)行頭面部保護(hù)，如戴口罩、眼罩或帽子等。不應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室中穿露趾鞋。應(yīng)定期對(duì)檢驗(yàn)人員體檢，建立檢驗(yàn)人員的健康檔案。工作結(jié)束要離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)，使用的防護(hù)用品應(yīng)先消毒，后摘除，脫去手套后須洗手。實(shí)驗(yàn)操作完畢后應(yīng)按“六步法”正確洗手。工作服由醫(yī)院統(tǒng)一清洗，不可帶回家。檢驗(yàn)人員不應(yīng)在工作區(qū)內(nèi)飲水、吃東西、吸煙、化妝、處理隱形眼鏡等，不得在工作區(qū)存放私人物品，未得到批準(zhǔn)不得在工作區(qū)內(nèi)接待外來(lái)客人。
2血液標(biāo)本采集及運(yùn)送中的安全防護(hù)
血細(xì)胞分析標(biāo)本分為靜脈血及末梢血兩種。靜脈血采集實(shí)施一人、一針、一管、一巾、一帶，條件允許的情況下，應(yīng)使用與儀器匹配的一次性安全真空采血管以取代傳統(tǒng)的針頭和注射器，這樣既保證了血液標(biāo)本檢測(cè)質(zhì)量又保證了工作人員采血及操作時(shí)的生物安全。末梢血采集應(yīng)做到一人、一針、一管、一片，對(duì)每位患者操作前后要認(rèn)真進(jìn)行手消毒。從患者身上拔出針頭及真空采血管與針頭分離時(shí)，要防止被針頭刺傷，不要給用過(guò)的注射器針頭戴護(hù)套。使用后的一次性針頭、玻片應(yīng)存放在耐刺、防滲漏的銳器盒內(nèi)，當(dāng)達(dá)到容量的3/4時(shí)就予以更換。末梢血采集時(shí)要避免血液直接接觸皮膚，如手不慎接觸到血液要立即洗手。采血時(shí)，可能會(huì)發(fā)生被針頭刺傷的情況，存在感染乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒（HCV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）的可能。針刺傷后是否發(fā)生感染取決于暴露時(shí)間、傷口深度、攜帶病毒的血量、是否接種疫苗等。血源性HBV的職業(yè)暴露最常見，而乙肝預(yù)苗的接種可減少HBV感染的風(fēng)險(xiǎn),因此建議檢驗(yàn)人員接種乙肝預(yù)苗，預(yù)防HBV感染[1]。標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用密閉容器盒，以確保工作人員及環(huán)境不被污染。
3 血細(xì)胞分析檢測(cè)過(guò)程中的安全防護(hù)
近年來(lái)，各類血細(xì)胞分析儀的普遍使用，靜脈血血細(xì)胞分析大都為全自動(dòng)檢測(cè)，一般無(wú)需將采血管蓋子打開，加樣針能直接插入采血管吸到標(biāo)本，整個(gè)分析過(guò)程構(gòu)成了一個(gè)封閉系統(tǒng)，避免了檢測(cè)過(guò)程中的污染問(wèn)題。血細(xì)胞分析過(guò)程中，采血管的開啟、加樣、振蕩均能產(chǎn)生大量氣溶膠，而全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀可以避免氣溶膠擴(kuò)散。氣溶膠是懸浮于氣體介質(zhì)中固體、液體微小粒子形成的膠溶狀態(tài)分散體系。氣溶膠無(wú)色無(wú)味、不易發(fā)現(xiàn)，檢驗(yàn)人員可在自然呼吸中不知不覺吸入而造成感染。靜脈血細(xì)胞分析有時(shí)也需要手動(dòng)操作，需將采血管蓋子打開，此分析過(guò)程不能構(gòu)成封閉系統(tǒng)，故不可避免的產(chǎn)生氣溶膠，因此手動(dòng)操作時(shí)建議戴口罩，可有效防止氣溶膠吸入體內(nèi)。多數(shù)醫(yī)院的檢驗(yàn)科，末梢血血細(xì)胞分析是手動(dòng)操作加樣的，開蓋及混勻要輕，避免產(chǎn)生過(guò)多氣溶膠。打開采血管時(shí)，可以用紙或紗布抓住蓋子以防止噴濺。實(shí)驗(yàn)完成后要立即蓋上采血管蓋，這可以減少氣溶膠的產(chǎn)生。手動(dòng)加樣時(shí)由于血液容易噴濺，建議戴口罩以防止氣溶膠吸入體內(nèi)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如有血液溢出，應(yīng)立即用布或紙巾覆蓋，然后在上面傾倒5g/L含氯消毒劑，作用30分鐘后將布或紙巾清理掉，再用1g/L含氯消毒劑擦拭污染區(qū)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中意外出現(xiàn)扎傷、皮膚污染血標(biāo)本時(shí)，應(yīng)立即用肥皂水清洗，再用大量流水沖洗傷口。根據(jù)銳器污染源的不同可采取相應(yīng)的預(yù)防措施，并進(jìn)行血源性傳染病的檢查和隨訪。黏膜、結(jié)膜被污染后應(yīng)用大量的水沖洗。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中還要防止間接傳播，接觸樣品的手污染了操作臺(tái)、儀器、物品等，都可能造成間接傳播。每日工作結(jié)束后用1g/L含氯消毒劑全面擦拭消毒，每日下班后開啟紫外燈對(duì)空氣消毒，照射時(shí)間一般應(yīng)大于30分鐘。
4 血細(xì)胞分析廢棄物的正確處理
實(shí)驗(yàn)完畢后，標(biāo)本用塑料膜封好，分類放入冰箱保存。保存期滿的標(biāo)本存放在雙層無(wú)滲透、無(wú)破損的黃色醫(yī)療廢物包裝袋中，當(dāng)達(dá)到3/4時(shí)，封好袋口由專人簽收送到廢棄物放置點(diǎn)，統(tǒng)一焚燒。盛放銳器的一次性容器，應(yīng)將其放入“感染性廢棄物”的容器中進(jìn)行焚燒,焚燒溫度應(yīng)高于800℃，如低于800℃就會(huì)產(chǎn)生二惡英、呋喃等有毒物質(zhì)。用過(guò)的廢液要經(jīng)過(guò)處理達(dá)到無(wú)害標(biāo)準(zhǔn)后才能排放。對(duì)一次性醫(yī)院廢物應(yīng)先消毒，再集中收回進(jìn)行毀形處理。
由于工作性質(zhì)特殊，血液實(shí)驗(yàn)室是一個(gè)與血液密切接觸的地方，而血液中可能存在各種病原微生物。如檢驗(yàn)人員缺乏生物安全意識(shí)，不加強(qiáng)安全防護(hù)，違規(guī)操作，可能會(huì)造成生物危害。只要檢驗(yàn)人員能重視生物安全防護(hù)工作，對(duì)潛在的生物危害有充分認(rèn)識(shí)，遵守操作規(guī)程，一定能將生物安全工作推上新的臺(tái)階。
[關(guān)鍵詞] 肝細(xì)胞癌；血清；代謝物組；LC-MS；主成分分析；模式識(shí)別
[中圖分類號(hào)] R735.7 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] C[文章編號(hào)] 1674-4721（2011）06（a）-085-02
目前，臨床上診斷肝癌的主要方法為病理、影像和血清AFP檢查。這些檢測(cè)手段中，病理法屬于有創(chuàng)性檢查，對(duì)患者造成組織損傷，不能作為常規(guī)檢查方法；B超、CT、磁共振成像對(duì)小肝癌灶檢出率較低；血清AFP檢查診斷肝癌靈敏度低，因此，建立一種無(wú)損、準(zhǔn)確、靈敏的肝癌診斷方法具有重要的臨床價(jià)值。代謝組學(xué)是一種通過(guò)考察生物體系受刺激或擾動(dòng)后代謝產(chǎn)物隨時(shí)間的變化，并以此來(lái)研究生物體系代謝途徑的新技術(shù)[1-2]。代謝組學(xué)作為新興的學(xué)科，已成功應(yīng)用于疾病診斷、藥物作用模型的鑒別和確證、藥物作用機(jī)制研究等領(lǐng)域[3-6]。目前代謝組學(xué)分析中常用的兩種檢測(cè)手段是核磁共振（NMR）技術(shù)和質(zhì)譜（MS）及其聯(lián)用技術(shù)。相比于NMR靈敏度低、檢測(cè)動(dòng)態(tài)范圍窄等弱點(diǎn)，現(xiàn)代MS技術(shù)的優(yōu)勢(shì)是具有很高的靈敏度和專屬性，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)多個(gè)化合物的同時(shí)快速分析與鑒定，現(xiàn)已成為生物分析中的首選方法。本研究采用LC-MS法檢測(cè)肝癌患者和健康人血清中代謝物，比較分析兩組血清代謝物組的差異，同時(shí)利用PCA對(duì)MS數(shù)據(jù)進(jìn)行模式識(shí)別，以期建立肝癌的診斷模型。
1 儀器與試劑
1.1 儀器
Agilent 1100型高效液相色譜儀，Agilent LC/MSD Trap XCT Plus 型質(zhì)譜儀、高壓二元梯度泵、二極管檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、Chemstations化學(xué)工作站等（美國(guó)Agilent公司），日立20PR-52D型高速冷凍離心機(jī)，電熱真空干燥箱（上海申光儀器儀表有限公司），KQ- 250 DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司），Milli-Q純化水制備系統(tǒng)(Millipore公司)。甲醇、乙腈均為色譜純（美國(guó)fisher公司）。
1.2 樣品的采集
分別采集30份男性肝癌患者以及30份健康男性 （無(wú)相關(guān)病史的健康人群)受試者靜脈血5 ml 至促凝管中，室溫下靜置1 h后在4℃、13 000 g離心10 min），置-80℃貯存?zhèn)溆谩２裳敖?2 h。肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)按照2001年中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)肝癌專業(yè)委員會(huì)修訂的肝癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，上清液LC-MSn分析。
1.3 LC-MS 條件
反向液相色譜（RP-LC），色譜柱：Prevail C18（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流動(dòng)相A：10mM甲酸銨緩沖液（甲酸調(diào)PH 4.0）；B：0.1%甲酸乙腈，A與B梯度洗脫：0～5 min，B%10～30，5～9 min，B% 30～60，9～20 min，B%60～70，20～25 min，B%70～100；柱溫：25°C；流速：0.8 ml/min；質(zhì)譜條件：ESI離子源，離子源溫度350℃，毛細(xì)管電壓3.5 kV，霧化壓力285.8 kPa，霧化壓力60.0 Psi，干燥氣流速11.0 L/min，質(zhì)譜掃描范圍75～800 m/z，正離子檢出模式。
2 結(jié)果
2.1 血清樣品檢測(cè)總離子流圖
按照以上實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)血清樣本進(jìn)行了分析測(cè)定，圖1中A、B分別是健康人和肝癌患者血清典型的LC-MS總離子流譜，圖中可見，正常人血清樣本的總離子流圖與肝癌患者血清樣本的總離子流圖有明顯區(qū)別。
A為健康人血清；B為肝癌患者血清
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2.2 肝癌的生物標(biāo)記物
通過(guò)LC-MS檢測(cè)，與正常人相比，肝癌患者血清中?；撬岷徒M氨酸含量減少，而苯丙氨酸、酪氨酸含量增加。?；撬崾侵匾目寡趸镔|(zhì)，曾有研究報(bào)道，其在肝硬化患者血清中含量增加，而肝癌患者血清中?；撬岷繘](méi)有改變[7]，但筆者研究發(fā)現(xiàn)牛磺酸在肝癌患者血清中含量減少，推測(cè)?；撬岬暮颗c肝癌病情程度有關(guān)，需要進(jìn)一步研究。
2.3 模式識(shí)別分析
利用PCA對(duì)正常人和肝癌患者兩組血清LC-MS數(shù)據(jù)進(jìn)行模式識(shí)別分析，得到相應(yīng)血清標(biāo)本的PCA得分圖（3D PCA Scores plot)。得分圖中每一個(gè)點(diǎn)代表了一個(gè)標(biāo)本，見圖2。從圖2中可以直觀地看出各血清標(biāo)本在空間上的位置以及相互聚合程度，圖2中肝癌和健康人標(biāo)本顯著分離，說(shuō)明兩者血清代謝物組確實(shí)存在顯著差異。
3 討論
為了探討利用代謝組學(xué)技術(shù)結(jié)合模式識(shí)別分析診斷肝癌的可行性，對(duì)肝癌患者血清LC-MS數(shù)據(jù)進(jìn)行PCA分析。結(jié)果表明肝癌患者可與健康人標(biāo)本100%區(qū)分開來(lái)，利用基于LC-MS代謝組學(xué)技術(shù)結(jié)合PCA的模式識(shí)別方法診斷肝癌診斷結(jié)果可靠。有利于臨床早期診斷、早期治療肝癌。此外，由于代謝組學(xué)反應(yīng)的是基因和蛋白表達(dá)終端的變化、是對(duì)基因組學(xué)和蛋白組學(xué)在代謝物研究上的放大，因此利用此技術(shù)診斷疾病更靈敏、快速。
[參考文獻(xiàn)]
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1.1細(xì)胞活力測(cè)定
采用Trypanblue拒染試驗(yàn)檢測(cè)凍存前及復(fù)蘇后細(xì)胞的存活率。將待檢細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，取細(xì)胞懸液與04％臺(tái)盼藍(lán)溶液以9∶1混合均勻（使臺(tái)盼藍(lán)溶液終濃度為004％），3min后觀察，并用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。鏡下觀察可見健康活細(xì)胞胞體完整、細(xì)胞透明、不著色，凡著色呈藍(lán)色者均為死細(xì)胞。計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞，計(jì)算細(xì)胞活率。
1.2生長(zhǎng)曲線繪制
向24孔培養(yǎng)板每孔內(nèi)接種1mL密度約為1×104個(gè)／mL細(xì)胞，從接種之日算起，每隔24h計(jì)數(shù)2個(gè)孔內(nèi)的細(xì)胞密度，算出平均值，連續(xù)測(cè)定12d，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)胞密度為縱坐標(biāo)，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。
1.3細(xì)胞染色體分析
選取第4代生長(zhǎng)良好的新生昆明犬成纖維細(xì)胞，按照常規(guī)方法［9］進(jìn)行染色體制片，Gimesa染色后選擇染色體分散與形態(tài)良好的分裂相在油鏡下觀察拍照，作核型圖，對(duì)50～100個(gè)分裂中期細(xì)胞進(jìn)行染色體數(shù)目統(tǒng)計(jì)。
2結(jié)果與分析
2.1細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察
新生昆明犬耳緣皮膚組織經(jīng)膠原酶分離培養(yǎng)3～4d后，鏡下觀察可見有少數(shù)細(xì)胞沿組織塊邊緣慢慢貼壁伸展，細(xì)胞形狀不規(guī)則，且其組織塊的生長(zhǎng)暈形成時(shí)間較長(zhǎng)。經(jīng)8～10d培養(yǎng)才出現(xiàn)大量成片生長(zhǎng)的優(yōu)勢(shì)細(xì)胞，此時(shí)觀察細(xì)胞的形態(tài)呈長(zhǎng)梭形、多角形或扁平星形，為典型的成纖維細(xì)胞形態(tài)。后再經(jīng)3～4d細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合，并長(zhǎng)滿整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面（圖1A），此時(shí)可進(jìn)行傳代和凍存。傳代后的細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，在形態(tài)上與原代細(xì)胞無(wú)明顯差異，經(jīng)2～3d即可長(zhǎng)至近100％匯合，此時(shí)細(xì)胞呈放射狀或渦旋狀走勢(shì)（圖1B）。待傳代時(shí)，加入消化液后顯微鏡下可見細(xì)胞回縮，呈圓形（圖1C）。
2.2成纖維細(xì)胞凍存前和復(fù)蘇后的活
耳部成纖維細(xì)胞凍存前和復(fù)蘇后的活率分別為933％，908％（圖2）。凍存前與復(fù)蘇后的細(xì)胞存活率差異不顯著（P＞005），說(shuō)明原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，培養(yǎng)條件適宜，且凍存和復(fù)蘇的過(guò)程對(duì)細(xì)胞活力狀況損害較小。
2.3生長(zhǎng)曲線
根據(jù)昆明犬耳部成纖維細(xì)胞接種于24孔板連續(xù)培養(yǎng)12d的細(xì)胞計(jì)數(shù)情況，繪制出了成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線（圖3）。昆明犬耳部成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線呈典型的“S”形，即經(jīng)過(guò)了潛伏生長(zhǎng)期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、平臺(tái)期以及衰亡期。其表現(xiàn)為1～2d的潛伏生長(zhǎng)期細(xì)胞總數(shù)基本保持不變，從第3天起，細(xì)胞數(shù)量開始增加，3～8d左右細(xì)胞明顯地進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞數(shù)量快速增長(zhǎng)，第8～9天，細(xì)胞由于缺乏足夠生長(zhǎng)空間而增長(zhǎng)放緩，開始進(jìn)入平臺(tái)期。第9天后，由于細(xì)胞數(shù)量的急劇增加、生長(zhǎng)空間的極大限制，經(jīng)過(guò)短暫的平臺(tái)期后，細(xì)胞發(fā)生接觸抑制快速進(jìn)入衰亡期，細(xì)胞生長(zhǎng)幾乎停止，隨后細(xì)胞逐漸脫落死亡，此時(shí)鏡下可見有大量凋亡細(xì)胞漂浮。由生長(zhǎng)曲線上的數(shù)據(jù)分析，耳部成纖維細(xì)胞群體倍增時(shí)間約為32h。
2.4核型觀察分析
昆明犬耳部成纖維細(xì)胞中期染色體分裂相與核型分析如圖4所示：染色體數(shù)目2n＝78（XX）。計(jì)數(shù)80個(gè)4代細(xì)胞的染色體數(shù)目，總數(shù)2n＝78的細(xì)胞數(shù)約占總細(xì)胞數(shù)的90％，達(dá)到了建立細(xì)胞系75％～80％的要求，說(shuō)明所建細(xì)胞系為穩(wěn)定的二倍體細(xì)胞系。39對(duì)染色體中有38對(duì)常染色體均為端著絲粒（T）染色體，長(zhǎng)度逐漸遞減；性染色體X，Y均為中央著絲粒（M），X染色體的長(zhǎng)度最大。
3討論
目前，國(guó)內(nèi)已有一些研究報(bào)道建立了比格犬胎兒成纖維細(xì)胞系［10］、德國(guó)牧羊犬耳部和腹部成纖維細(xì)胞系［11］及雜交犬皮膚成纖維細(xì)胞系［12］等，但利用犬類的這些細(xì)胞遺傳資源進(jìn)行更加廣泛深入的研究（如醫(yī)療和動(dòng)物模型的建立、體細(xì)胞克隆等）還十分欠缺。在國(guó)外，已有較多使用所建立的犬胎兒或成體成纖維細(xì)胞系進(jìn)行體細(xì)胞核移植（SCNT）的研究［13－16］。值得注意的是，在警用工作犬領(lǐng)域，7頭世界首批體細(xì)胞克隆警犬于2007年底在韓國(guó)誕生［17］，2009年韓國(guó)克隆專家根據(jù)美國(guó)911英雄警犬“特拉克”的遺傳信息，再次利用體細(xì)胞克隆技術(shù)成功獲得了5頭牧羊犬（http：／／wwwcnwnewscom／html／tech／cnkpzs／20090621／122171html）。LEE等［18］將曾服役于韓國(guó)國(guó)家緊急事務(wù)管理署（NEMA）具有6年全球救援經(jīng)驗(yàn)的退役搜救犬進(jìn)行克隆，最終獲得2頭克隆犬。這些克隆后代中大多數(shù)工作犬已服役并具備與父輩同樣卓越的工作性能。同時(shí)，OH等［19］的研究也表明，利用SCNT技術(shù)將能使一頭優(yōu)秀的檢驗(yàn)檢疫犬復(fù)制出一群同樣優(yōu)秀的檢驗(yàn)檢疫犬。體細(xì)胞克隆技術(shù)最大的優(yōu)勢(shì)在于克隆出生的動(dòng)物與供體細(xì)胞來(lái)源的動(dòng)物具有幾乎100％相同的基因，即能完全保持親代優(yōu)異的先天特質(zhì)。要成為一只優(yōu)秀的警犬，就必須要具備高智商、敏銳的嗅覺、良好的親和能力等警犬所必備的各種特質(zhì)。按照傳統(tǒng)的警犬繁育方式，培育出一頭優(yōu)秀警犬至少需要3～4年時(shí)間，花費(fèi)約10萬(wàn)元，期間要消耗大量的人力、物力和時(shí)間，且培訓(xùn)的優(yōu)秀率低，不超過(guò)12％；而要培養(yǎng)出一頭功勛級(jí)的警犬需要付出的代價(jià)就更大，最少需數(shù)10人，4～5年時(shí)間，約50萬(wàn)元的費(fèi)用，且培養(yǎng)出一頭功勛級(jí)警犬的效率很低，約8‰。而動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)可以批量復(fù)制優(yōu)秀、功勛級(jí)的警犬，可以大大降低培育成本，提高培養(yǎng)功勛警犬的培育效率。因此，體細(xì)胞核移植技術(shù)在警犬繁育中具有廣闊的應(yīng)用前景。然而，體細(xì)胞核移植技術(shù)首先必須要解決的是供體細(xì)胞的來(lái)源和體細(xì)胞分離培養(yǎng)的問(wèn)題。本研究利用膠原酶消化法建立了新生昆明犬耳部成纖維細(xì)胞系，并對(duì)其體外培養(yǎng)的生物學(xué)特性也進(jìn)行了初步的分析與探討。在動(dòng)物成纖維細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)中，分離組織可以取自胎兒、新生幼仔及成體動(dòng)物［20－22］。其中，胎兒取材不僅難度大、成本高，且對(duì)優(yōu)良品種的保存也十分不利。相反地，新生幼仔或成體動(dòng)物耳部、腹部及腹股溝等部位皮膚組織的取材則顯得十分便捷，且不影響動(dòng)物的健康成長(zhǎng)。本試驗(yàn)取材自新生昆明犬耳緣皮膚組織（＜1cm2），對(duì)于新生仔犬，其傷口愈合快、皮膚組織修復(fù)能力強(qiáng)，應(yīng)激性小且容易護(hù)理。另外，新生幼犬較成犬組織分化程度低，其成纖維細(xì)胞理論上應(yīng)具有較強(qiáng)的增殖能力、易培養(yǎng)及適于進(jìn)行相關(guān)基因操作研究。本試驗(yàn)所建立的新生昆明犬耳部成纖維細(xì)胞具有典型的成纖維細(xì)胞形態(tài)，如細(xì)胞呈梭形或星形，當(dāng)生長(zhǎng)至匯合時(shí)細(xì)胞會(huì)平行排列，呈渦旋狀和放射狀生長(zhǎng)。其凍存前和復(fù)蘇后存活率差異不顯著（P＞005），細(xì)胞復(fù)蘇后增殖快、生命力旺盛，且形態(tài)未發(fā)生變化。這表明凍存和復(fù)蘇過(guò)程中的各項(xiàng)條件對(duì)細(xì)胞活力影響較小，試驗(yàn)中采用的凍存和復(fù)蘇的方法是可行的。
[關(guān)鍵詞]生物 細(xì)胞分析
高中生物教材（人教版）在第六章細(xì)胞的生命歷程中，對(duì)細(xì)胞增殖過(guò)程中染色體（質(zhì)）行為變化做了詳細(xì)的分析，同時(shí)也是考試的重點(diǎn)。然而大部分教師對(duì)細(xì)胞分化、細(xì)胞衰老、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞癌變過(guò)程中染色體（質(zhì)）的行為變化卻知之甚少。筆者在閱讀了相關(guān)書籍之后，對(duì)上述問(wèn)題做如下總結(jié)。
1.細(xì)胞分化與染色體（質(zhì)）行為變化的關(guān)系
細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)是組織特異性基因（奢侈基因 luxurygenes ）在時(shí)間和空間上的差異表達(dá)（differential gene express）。這種差異表達(dá)不僅涉及基因轉(zhuǎn)錄水平和轉(zhuǎn)錄后加工水平上的精確調(diào)控，而且涉及染色體（質(zhì)）修飾等復(fù)雜的調(diào)控過(guò)程。這里的染色體（質(zhì)）修飾主要是指DNA的甲基化。DNA甲基化（DNA methylation）是在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下，DNA的CG兩個(gè)核苷酸的胞嘧啶被選擇性地添加甲基，形成5-甲基胞嘧啶，這常見于基因的5'-CG-3'序列。甲基化位點(diǎn)可隨著DNA的復(fù)制而遺傳，因?yàn)镈NA復(fù)制后，甲基化酶可以將新合成的未甲基化的位點(diǎn)進(jìn)行甲基化。DNA甲基化可以引起基因的失活，從而使細(xì)胞不需要表達(dá)的基因不表達(dá)，進(jìn)而達(dá)到差異表達(dá)（選擇性表達(dá)）的目的。如下圖
2.細(xì)胞衰老與染色體（質(zhì)）行為變化的關(guān)系
染色質(zhì)固縮化是衰老細(xì)胞核中另一個(gè)重要變化。體外培養(yǎng)的細(xì)胞中，晚代細(xì)胞的核中可看到明顯的染色質(zhì)固縮化，而早代細(xì)胞的核只有輕微的固縮作用。除了培養(yǎng)細(xì)胞外，體內(nèi)細(xì)胞，如老年果蠅的細(xì)胞等，都可以觀察到染色質(zhì)的固縮化。染色質(zhì)固縮與染色質(zhì)蛋白的二硫鍵數(shù)量有關(guān)。
3.細(xì)胞凋亡與染色體（質(zhì)）行為變化的關(guān)系
細(xì)胞凋亡細(xì)胞的核DNA在核小體連接處斷裂成核小體片段，并向核膜下或中央異染色質(zhì)區(qū)凝聚形成濃縮的染色質(zhì)塊。隨著染色質(zhì)不斷凝聚，核纖層斷裂消失，核膜在核孔處斷裂形成核碎片。凋亡細(xì)胞的核經(jīng)核碎裂形成染色質(zhì)塊（核碎片），然后整個(gè)細(xì)胞通過(guò)發(fā)芽、起泡等方式形成一些球形的突起，并在基部絞斷而脫落產(chǎn)生大小不等內(nèi)含胞質(zhì)、細(xì)胞器及核碎片的凋亡小體；或通過(guò)分隔機(jī)制形成凋亡小體。總言之，細(xì)胞凋亡最突出的生化特征是染色質(zhì)DNA的有控裂解，并且是由于內(nèi)源性內(nèi)切核酸酶基因的活化和表達(dá)而造成的結(jié)果。這種由內(nèi)源性內(nèi)切核酸酶切割的染色質(zhì)DN段大小是有規(guī)律的，即都為200bp的倍數(shù)。如下圖
〖JZ〗〖HZ（〗〖XC王麗英1.TIF〗〖HZ）〗
【關(guān)鍵詞】紅細(xì)胞 生物教學(xué)
紅細(xì)胞又稱紅血球或紅血細(xì)胞，是血液中最多的一種血細(xì)胞。紅細(xì)胞分為兩類，一是哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞；另一類是非哺乳動(dòng)物（鳥類、兩棲類、魚類）的紅細(xì)胞。下面著重介紹與這兩個(gè)方面相關(guān)的知識(shí)內(nèi)容。
1.哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞
1.1 基因突變的實(shí)例。正常人的紅細(xì)胞呈雙凹圓餅狀，中央較薄，周緣較厚，而鐮刀型細(xì)胞貧血癥患者的紅細(xì)胞卻是彎曲的鐮刀狀，這種細(xì)胞形狀上的改變用光學(xué)顯微鏡是可以觀察到。究其原因，鐮刀型細(xì)胞貧血癥屬于基因突變的結(jié)果。而基因突變是染色體的某一位點(diǎn)上基因的改變，這種改變?cè)诠鈱W(xué)顯微鏡下是無(wú)法直接觀察到的。所以講到基因突變就經(jīng)常提及鐮刀型細(xì)胞貧血癥。
1.2 制備細(xì)胞膜。哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞，它沒(méi)有細(xì)胞核和眾多的具膜細(xì)胞器，即除細(xì)胞膜外無(wú)其他的膜結(jié)構(gòu)，因此可以獲得較純凈的細(xì)胞膜，加之取材方便。故在 “體驗(yàn)制備細(xì)胞膜的方法” 實(shí)驗(yàn)中，被認(rèn)為是最理想的材料。
1.3 研究動(dòng)物細(xì)胞的吸水和失水。正常狀態(tài)下紅細(xì)胞內(nèi)的滲透壓與血漿滲透壓大致相等，這對(duì)保持紅細(xì)胞的形態(tài)甚為重要。加之動(dòng)物細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞壁，將紅細(xì)胞置于等滲溶液（NaCl/0.9%）中，它能保持正常的大小和形態(tài)；將紅細(xì)胞放在低滲溶液中，水分將進(jìn)入細(xì)胞，紅細(xì)胞容易吸水膨脹變成球形，可至膨脹而破裂；相反，將紅細(xì)胞放在高濃度溶液中，水分將逸出細(xì)胞外，紅細(xì)胞將因失水而皺縮。這些變化在光學(xué)顯微鏡都很容易觀察到。所以，它又是研究“動(dòng)物細(xì)胞的吸水和失水”的好材料。
1.4 真核細(xì)胞并非都有細(xì)胞核。真核細(xì)胞與原核細(xì)胞的區(qū)別就是前者有真正的細(xì)胞核，但并不是所有的真核細(xì)胞都有細(xì)胞核。如哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞就無(wú)核，這樣一來(lái)，就成了除哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞等少數(shù)細(xì)胞以外，真核細(xì)胞都有細(xì)胞核。
1.5 細(xì)胞只有保持完整性才能完成各項(xiàng)生命活動(dòng)。哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞無(wú)核，所以一般不能存活多久，即壽命都很短。紅細(xì)胞與健康紅細(xì)胞平均壽命為120天，每天都有一定數(shù)量的紅細(xì)胞進(jìn)行更新。原因是細(xì)胞的各個(gè)部分不是彼此孤立的，而是互相緊密聯(lián)系、協(xié)調(diào)一致的，細(xì)胞只有保持完整性，才能夠正常地完成各項(xiàng)生命活動(dòng)。這也有力地說(shuō)明細(xì)胞完整性的重要意義。
1.6 體細(xì)胞并非都存在等位基因。哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞無(wú)核，故不含DNA（DNA主要存在細(xì)胞核中），進(jìn)而也不存在染色體，當(dāng)然也就不存在等位基因。
1.7 故衰老的紅細(xì)胞沒(méi)有核體積變化。衰老的細(xì)胞，細(xì)胞核的體積增大，核膜內(nèi)折，染色質(zhì)收縮、染色加深。哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞無(wú)核，故衰老的紅細(xì)胞沒(méi)有核體積變化這個(gè)特征。
1.8 人體的細(xì)胞并非都進(jìn)行有氧呼吸的。哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中沒(méi)有線粒體，也就是說(shuō)沒(méi)有有氧呼吸的場(chǎng)所，所以只能進(jìn)行無(wú)氧呼吸。這也說(shuō)明人體的細(xì)胞并不都是進(jìn)行有氧呼吸的。
1.9 紅細(xì)胞跨膜運(yùn)輸?shù)姆绞健２溉閯?dòng)物成熟紅細(xì)胞內(nèi)無(wú)線粒體，通過(guò)無(wú)氧呼吸釋放能量，因能量的利用效率較低，所以葡萄糖進(jìn)入紅細(xì)胞為協(xié)助擴(kuò)散；而其他細(xì)胞有線粒體能進(jìn)行有氧呼吸，能量的利用效率較高，故葡萄糖進(jìn)入其他細(xì)胞則為主動(dòng)運(yùn)輸。
1.10 提取血紅蛋白。血液由血漿和各種血細(xì)胞組成，其中紅細(xì)胞最多。在紅細(xì)胞的組成中，除水分以為，約90%是血紅蛋白。故用哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞提取血紅蛋白。
1.11 血紅蛋白和血漿蛋白。紅細(xì)胞的主要功能是運(yùn)輸O2和CO2，此外還在酸堿平衡中起一定的緩沖作用。這兩項(xiàng)功能都是通過(guò)紅細(xì)胞中的血紅蛋白來(lái)實(shí)現(xiàn)的。如果紅細(xì)胞破裂，血紅蛋白釋放出來(lái)，溶解于血漿中，即喪失上述功能。血紅蛋白是紅細(xì)胞內(nèi)部的成分，不在細(xì)胞外液（相對(duì)人體外部環(huán)境來(lái)說(shuō)，又稱為內(nèi)環(huán)境），即血紅蛋白不屬于人體內(nèi)環(huán)境組成成分；血漿是血細(xì)胞直接生活的環(huán)境，血漿中的蛋白質(zhì)稱血漿蛋白，它屬于人體內(nèi)環(huán)境組成成分。
2.非哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞
2.1 無(wú)絲分裂。無(wú)絲分裂是最早發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞的分裂方式，早在1841年就在雞胚的的血細(xì)胞中看到了。因?yàn)樵诜至验_過(guò)程中核膜、核仁不消失，無(wú)染色體和紡錘絲的變化，所以叫無(wú)絲分裂，它是真核細(xì)胞的一種分裂方式，如蛙的紅細(xì)胞分裂方式就是這樣。
2.2 提取DNA。非哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞仍然有核，含DNA。對(duì)雞血細(xì)胞來(lái)說(shuō)是一種低滲液體，水分子可以大量進(jìn)入血細(xì)胞，使血細(xì)胞脹裂，同時(shí)用玻璃棒攪拌，就加速了雞血細(xì)胞的破裂，從而釋放DNA，過(guò)濾后收取濾液即可。
關(guān)鍵詞：地福來(lái)生物細(xì)胞肥；示范；增產(chǎn)效果分析
中圖分類號(hào) S14 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2013）24-71-02
生物肥料是作物用肥的發(fā)展方向。根據(jù)產(chǎn)品介紹，“地福來(lái)”活性細(xì)胞肥，利用生物固氮，能為農(nóng)作物的整個(gè)生長(zhǎng)周期提供所需的30%～50%的氮肥，即節(jié)約30%～50%的氮肥用量，作物施用這種“細(xì)胞肥”后，不僅能增加作物產(chǎn)量、縮短生長(zhǎng)周期、提高品質(zhì)、減少化肥使用量、改良土壤，而且能夠增強(qiáng)作物抗逆性、抗病蟲害的能力。所以，2013年筆者在樅陽(yáng)縣布置了3個(gè)水稻示范點(diǎn)。具體如下：
1 樅陽(yáng)縣浮山示范點(diǎn)示范情況
1.1 示范目的 本次示范目的是在同等的施肥管理水平下，增加水稻產(chǎn)量。
1.2 示范地點(diǎn) 樅陽(yáng)縣浮山鄉(xiāng)。
1.3 示范方法 對(duì)比法。
1.4 示范情況 栽培方式：育苗移栽；品種：優(yōu)Ⅰ402；用種量：2kg/667m2；4月5日播種，5月4日移栽，5月13日除草。分別于4月28日防治灰飛虱、稻薊馬；5月21日防治稻薊馬；6月20日防治稻苞蟲，紋枯病。
表1 浮山地福來(lái)生物細(xì)胞肥水稻施用示范基本情況
[示范品種＼&栽培方式＼&施用時(shí)間
（月/日）＼&用肥量
（mL/667m2）＼&施肥方式＼&優(yōu)Ⅰ402＼&秧田＼&4/18＼&200＼&噴霧＼&優(yōu)Ⅰ402＼&育苗移栽＼&5/24＼&200＼&噴霧＼&]
6月24日，示范田早稻正處抽孕穗期，平均莖蘗15.6個(gè)，對(duì)照平均莖蘗13.6個(gè)。預(yù)計(jì)抽穗比對(duì)照早7d左右。
1.5 7月22日，對(duì)浮山示范點(diǎn)進(jìn)行測(cè)產(chǎn)，結(jié)果如表2：
從表2可以看出，主要表現(xiàn)地福來(lái)大田專用肥示范田比對(duì)照田有效穗數(shù)多3.16萬(wàn)/667m2，由于分蘗穗多，示范田平均穗粒數(shù)、結(jié)實(shí)率比對(duì)照田略低，經(jīng)計(jì)算產(chǎn)量結(jié)果得出，浮山點(diǎn)地福來(lái)大田專用肥示范田比對(duì)照田增產(chǎn)57.51kg/667m2。
表2 浮山示范點(diǎn)理論產(chǎn)量構(gòu)成與產(chǎn)量
[處理＼&穗數(shù)（萬(wàn)/667m2）＼&每穗粒數(shù)＼&結(jié)實(shí)率（%）＼&千粒重
（g）＼&理論產(chǎn)量
（kg/667m2）＼&實(shí)際產(chǎn)量
（kg/667m2）＼&總粒數(shù)＼&實(shí)粒數(shù)＼&專用肥＼&17.35＼&117.86＼&106.81＼&90.6＼&25＼&463.29＼&393.8＼&對(duì)照＼&14.19＼&118.06＼&111.5＼&94.4＼&25＼&395.64＼&336.29＼&]
2 陳瑤湖示范點(diǎn)示范情況
2.1 示范目的 本次示范目的是在同等管理水平，施用地福來(lái)大田專用肥的示范田比對(duì)照田每667m2減少5kg氮、磷、鉀含量18%的復(fù)合肥的條件下，分析增產(chǎn)效果。
2.2 示范地點(diǎn) 樅陽(yáng)縣陳瑤湖鄉(xiāng)
2.3 示范方法 同一田塊，共0.533hm2，一分為二，示范田、對(duì)照田各0.266hm2。進(jìn)水口為對(duì)照田，出水口為示范田。
2.4 示范情況 栽培方式為點(diǎn)播；品種早稻嘉興8號(hào)；用種量7.5kg/667m2；4月18日撒播。
除草時(shí)間：4月25日用36%直播凈45～60g/667m2兌水45～60kg均勻細(xì)致噴霧。藥后7d內(nèi)保持畦面濕潤(rùn)狀態(tài)。
5月21日，秧齡33d進(jìn)行秧苗素質(zhì)考察，地福來(lái)大田專用肥示范田秧苗比對(duì)照株高高8.3cm，平均分蘗數(shù)多0.4個(gè)，綠葉數(shù)、白根數(shù)等都有優(yōu)勢(shì)。具體情況如表4。
表3 陳瑤湖地福來(lái)生物細(xì)胞肥水稻施用示范基本情況
[處理＼& 施肥一 ＼& 施肥二 ＼& 施肥三 ＼&種類＼&數(shù)量
（mL/667m2）＼&施肥時(shí)間＼&種類＼&數(shù)量
（kg/667m2）＼&施肥時(shí)間＼&種類＼&數(shù)量
（kg/667m2）＼&施肥時(shí)間＼&地福來(lái)示范田＼&地福來(lái)專用肥＼&200＼&5月2日＼&46%尿素＼&15＼&5月16日＼&48%復(fù)合肥＼&20＼&5月21日＼&對(duì)照田＼&空白＼&0＼&5月2日＼&46%尿素＼&15＼&5月16日＼&48%復(fù)合肥＼&25＼&5月21日＼&]
表4 5月21日秧苗素質(zhì)考察記載
[處理＼&綠葉數(shù)
（片）＼&株高
（cm）＼&根數(shù)（個(gè)）＼&分蘗數(shù)
（個(gè)）＼&總根數(shù)
（個(gè)）＼&白根數(shù)
（個(gè)）＼&白根率
（%）＼&地福來(lái)
專用肥＼&4～4.5＼&30.61＼&22.1＼&10.4＼&47.06＼&1.5＼&對(duì)照＼&4～5＼&22.31＼&17.7＼&6.8＼&38.42＼&1.1＼&]
2.5 產(chǎn)量結(jié)果分析 7月14日，對(duì)陳瑤湖周真信早稻示范田進(jìn)行測(cè)產(chǎn)，從表5可以看出，地福來(lái)大田專用肥示范田比對(duì)照田667m2有效穗數(shù)多3.34萬(wàn)穗，平均穗粒數(shù)、結(jié)實(shí)率比對(duì)照略低，經(jīng)計(jì)算得出，地福來(lái)大田專用肥陳瑤湖示范田比對(duì)照田增產(chǎn)31.47kg/667m2。
表5 陳瑤湖點(diǎn)理論產(chǎn)量構(gòu)成與實(shí)際產(chǎn)量
[處理＼&667m2
穗數(shù)（萬(wàn)）＼&每穗粒數(shù)＼&結(jié)實(shí)率（%）＼&千粒重
（g）＼&理論產(chǎn)量
（kg/667m2）＼&實(shí)際產(chǎn)量
（kg/667m2）＼&總粒數(shù)＼&實(shí)粒數(shù)＼&地福來(lái)
專用肥＼&22.67＼&93.72＼&84.97＼&90.65＼&25＼&481.52＼&409.29＼&對(duì)照＼&19.33＼&102.5＼&91.96＼&89.72＼&25＼&444.50＼&377.82＼&]
3 項(xiàng)鋪鎮(zhèn)唐山圩示范點(diǎn)情況
3.1 示范目的 本次示范目的是在同等的施肥管理水平下，以增加產(chǎn)量為目的。
3.2 示范地點(diǎn) 項(xiàng)鋪鎮(zhèn)唐山圩周學(xué)斌示范田
3.3 示范方法 同一田塊，共計(jì)0.667hm2，示范田0.333hm2、對(duì)照田0.333hm2。進(jìn)水口為對(duì)照田，出水口為示范田。
3.4 示范情況記載 栽培方式為機(jī)插秧；品種為單季糯稻品種：太湖糯。6月24日機(jī)插秧，秧齡20d。6月25日開始下大雨，秧苗水淹3d以上，7月9日秧苗補(bǔ)棵結(jié)束。9月5日進(jìn)入孕穗期。9月9日田間觀察，分蘗數(shù)無(wú)差別。
施肥情況：（第一次）6月中旬，施基肥17%復(fù)合肥20kg/667m2。機(jī)插秧苗后7d即7月4日追施尿素7.5kg/667m2。退水后（第二次）追施12.5kg/667m2尿素。返青后（第三次）追施10kg/667m2尿素，18%復(fù)合肥15kg/667m2。7月30日，示范田施用地福來(lái)大田專用肥200mL/667m2（1瓶），對(duì)照田未施用。9月4日，追施（穗肥）BB肥12.5kg/667m2。整個(gè)生育期共施用3次葉面肥（7月22日、8月10日、9月30日）。
3.5 產(chǎn)量結(jié)果分析 10月6日，對(duì)唐山圩示范田進(jìn)行測(cè)產(chǎn)，結(jié)果如表6。當(dāng)時(shí)示范田內(nèi)水稻正值灌漿期，所以只測(cè)667m2有效穗和每穗總粒數(shù)。結(jié)實(shí)率統(tǒng)一按90%計(jì)算。從苗情長(zhǎng)勢(shì)分析，預(yù)計(jì)示范田比對(duì)照田成熟期早5～6d。
表6 唐山圩點(diǎn)理論產(chǎn)量構(gòu)成與實(shí)際產(chǎn)量
[處理＼&穗數(shù)（萬(wàn)/667m2）＼&每穗粒數(shù)＼&結(jié)實(shí)率（%）＼&千粒重
（g）＼&理論
產(chǎn)量
（kg/667m2）＼&實(shí)際
產(chǎn)量
（kg/667m2）＼&總粒數(shù)＼&實(shí)粒數(shù)＼&地福來(lái)
專用肥＼&19.93＼&115.7＼&104＼&90＼&27＼&542.62＼&462.2＼&對(duì)照＼&19.83＼&94.71＼&85.24＼&90＼&27＼&456.38＼&387.9＼&]
4 結(jié)論
在首都醫(yī)科大學(xué)“以學(xué)生學(xué)習(xí)成長(zhǎng)為核心”的第四輪教育教學(xué)改革中，利用學(xué)?，F(xiàn)有的BB平臺(tái)，在細(xì)胞生物學(xué)課程中引入了翻轉(zhuǎn)課堂教學(xué)模式，開創(chuàng)性地進(jìn)行了教學(xué)改革的有益嘗試。
1.1教學(xué)分析
教學(xué)分析包括教學(xué)內(nèi)容分析和學(xué)習(xí)者分析。細(xì)胞生物學(xué)理論知識(shí)多，比較枯燥抽象，學(xué)生學(xué)習(xí)起來(lái)覺得難理解和掌握。因此在此基礎(chǔ)上我們對(duì)知識(shí)點(diǎn)進(jìn)行梳理和分析，根據(jù)每個(gè)知識(shí)點(diǎn)制作短小視頻，每個(gè)視頻時(shí)間為10分鐘左右，視頻里除了針對(duì)各個(gè)知識(shí)點(diǎn)講解的錄像外，還制作了動(dòng)畫，如細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合、細(xì)胞轉(zhuǎn)染等動(dòng)畫，用動(dòng)畫演示了整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程，深受學(xué)生的歡迎。
1.2創(chuàng)建自主學(xué)習(xí)環(huán)境，支持學(xué)生課下學(xué)習(xí)
翻轉(zhuǎn)課堂中學(xué)生獲取新知識(shí)的主要渠道是課下的自主學(xué)習(xí)過(guò)程，因此有必要?jiǎng)?chuàng)建自主學(xué)習(xí)的環(huán)境，幫助學(xué)生順利完成課下的“知識(shí)獲取”。（1）教師設(shè)計(jì)制作教學(xué)視頻，學(xué)生只要有智能手機(jī)接入互聯(lián)網(wǎng)，就可以根據(jù)自己的需要，實(shí)時(shí)掃描二維碼觀看相關(guān)教學(xué)視頻，從而隨時(shí)隨地利用碎片時(shí)間來(lái)學(xué)習(xí)，實(shí)現(xiàn)指尖上的移動(dòng)學(xué)習(xí)。（2）支持學(xué)生的協(xié)作學(xué)習(xí)，學(xué)生可以利用網(wǎng)絡(luò)交流平臺(tái)與教師、同伴隨時(shí)展開討論。
1.3課前學(xué)習(xí)效果評(píng)價(jià)設(shè)計(jì)
教師以教學(xué)目標(biāo)為依據(jù)設(shè)計(jì)一些題目，供學(xué)生在學(xué)習(xí)視頻后完成，并運(yùn)用有效的技術(shù)手段對(duì)學(xué)生的學(xué)習(xí)活動(dòng)過(guò)程及結(jié)果進(jìn)行測(cè)量，給予評(píng)價(jià)，以檢測(cè)其對(duì)知識(shí)的掌握程度。
1.4課中實(shí)施
在翻轉(zhuǎn)課堂的教學(xué)模式中，由于課前經(jīng)過(guò)深度預(yù)習(xí)，學(xué)生對(duì)要學(xué)習(xí)的知識(shí)有了一定的理解和掌握，因此在課堂上教師可以實(shí)行項(xiàng)目引領(lǐng)、任務(wù)驅(qū)動(dòng)措施，讓每一位學(xué)生都參與到項(xiàng)目中，在項(xiàng)目進(jìn)展中遇到問(wèn)題時(shí)，組內(nèi)協(xié)作解決或咨詢教師。如在微管組裝中，讓學(xué)生選擇微管組裝所需的材料和條件，教師巡視，對(duì)有問(wèn)題的小組和學(xué)生及時(shí)給予指導(dǎo)。這種教學(xué)模式優(yōu)化了課堂結(jié)構(gòu)，在學(xué)生主動(dòng)建構(gòu)知識(shí)的過(guò)程中將課堂上的互動(dòng)引向更深層次，讓學(xué)生動(dòng)起來(lái)、讓課堂活起來(lái)，實(shí)現(xiàn)了知識(shí)的應(yīng)用創(chuàng)新。
1.5學(xué)習(xí)成果交流展示
在BB平臺(tái)上，教師將課堂中觀察到的問(wèn)題進(jìn)行梳理，將在課堂中動(dòng)態(tài)性生成的資源和學(xué)生的作品收集整理后與學(xué)生分享，這些內(nèi)容能被長(zhǎng)期保存，在學(xué)生遇到問(wèn)題時(shí)可隨時(shí)查閱。另外，因病或參加其他活動(dòng)缺席的學(xué)生可以利用這些資源來(lái)補(bǔ)課，學(xué)習(xí)困難的學(xué)生也可通過(guò)教師提供的資源進(jìn)行補(bǔ)救性學(xué)習(xí)。同時(shí)，設(shè)立學(xué)習(xí)成果交流展示區(qū)，學(xué)生將自己的探究結(jié)果以及在探究過(guò)程中的心得與同班同學(xué)進(jìn)行交流，實(shí)現(xiàn)思想的碰撞。
2研究意義
通過(guò)翻轉(zhuǎn)課堂可以實(shí)現(xiàn)知識(shí)傳授和知識(shí)內(nèi)化過(guò)程的顛倒安排，使學(xué)生成為學(xué)習(xí)過(guò)程的主體，促進(jìn)學(xué)生自學(xué)能力的提高，使學(xué)生自己掌控學(xué)習(xí)的進(jìn)度和速度，并尋求教師的個(gè)性化指導(dǎo)。翻轉(zhuǎn)課堂所倡導(dǎo)的“以信息技術(shù)帶動(dòng)教學(xué)結(jié)構(gòu)變革和學(xué)生個(gè)性化全面發(fā)展”與新課程改革的核心理念“一切為了每一位學(xué)生發(fā)展”的要義相契合。翻轉(zhuǎn)課堂的教學(xué)實(shí)踐已在國(guó)內(nèi)外多個(gè)地區(qū)取得極大的成功，促進(jìn)了教育信息化的發(fā)展。在深化教育教學(xué)改革和全面推進(jìn)教育國(guó)際化的過(guò)程中，以培養(yǎng)大學(xué)生終身學(xué)習(xí)能力為目標(biāo)，積極探索培養(yǎng)高素質(zhì)創(chuàng)新型人才的途徑和方法已成為當(dāng)前高等教育改革與發(fā)展的主題。首都醫(yī)科大學(xué)啟動(dòng)了第四輪教育教學(xué)改革，其主題是“以學(xué)生學(xué)習(xí)成長(zhǎng)為核心，以提升教育教學(xué)質(zhì)量水平為目標(biāo)，以內(nèi)涵發(fā)展為基礎(chǔ)，推進(jìn)我校人才培養(yǎng)綜合改革”。翻轉(zhuǎn)課堂作為一種新興的教學(xué)模式，顛覆了傳統(tǒng)的教學(xué)過(guò)程，它將知識(shí)傳遞過(guò)程放在課堂外，學(xué)生借助于教師制作的教學(xué)視頻和開放的網(wǎng)絡(luò)資源自主完成知識(shí)的建構(gòu)，而課堂則成為他們完成作業(yè)、探討問(wèn)題或得到個(gè)性化指導(dǎo)的地方。因此，在翻轉(zhuǎn)課堂中，學(xué)生成為整個(gè)教與學(xué)過(guò)程中的主體，所有的知識(shí)都需要學(xué)生在自主學(xué)習(xí)和動(dòng)手的過(guò)程中掌握。通過(guò)翻轉(zhuǎn)課堂教學(xué)模式下細(xì)胞生物學(xué)的教學(xué)設(shè)計(jì)與應(yīng)用，圍繞教學(xué)改革精神，創(chuàng)造學(xué)生自主學(xué)習(xí)的良好氛圍，提高學(xué)生的學(xué)習(xí)積極性，促進(jìn)了學(xué)生自主學(xué)習(xí)能力的提升。
3需要注意的問(wèn)題
通過(guò)翻轉(zhuǎn)課堂的實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，在實(shí)施過(guò)程中要注意以下一些問(wèn)題。
（1）翻轉(zhuǎn)課堂的教學(xué)視頻是學(xué)生學(xué)習(xí)的重要資源，教學(xué)視頻的制作需要教師從視頻的內(nèi)容、視頻的設(shè)計(jì)形式、視頻的長(zhǎng)短、視頻的吸引力等方面思考，這要求教師認(rèn)真研究教學(xué)內(nèi)容，更要求教師具有現(xiàn)代信息技術(shù)知識(shí)和信息技術(shù)素養(yǎng)。
（2）翻轉(zhuǎn)課堂需要學(xué)生在課外學(xué)習(xí)，積極參與課堂活動(dòng)，學(xué)生的自覺性和學(xué)習(xí)能力是實(shí)施翻轉(zhuǎn)課堂的基礎(chǔ)。因此，針對(duì)一些學(xué)習(xí)意志力較差、學(xué)習(xí)能力不強(qiáng)的學(xué)生，還需要教師的引導(dǎo)和幫助，以培養(yǎng)他們的自主學(xué)習(xí)能力。
