摘要:糖苷水解酶第一家族(GH1)β-葡萄糖苷酶(BGL1)有葡萄糖耐受性,進口端位點對酶活性及葡萄糖耐受性有很大影響,但具體作用機制尚不清楚。對嗜熱革節(jié)孢GH1 BGL1進口端的W168、L173、F348、W349、C169、F180、D237、Y179、A260、H307、N335和E437這12個氨基酸殘基進行定點突變,將突變酶與野生酶(WT)在畢赤酵母中表達,表達產物純化后進行酶活性和葡萄糖耐受性測定。與WT相比,所有突變酶活性均有所降低,其中W168H、N335F和W349G幾乎喪失活性。突變F180H、D237S、A260N和H307Y的Km低于WT,所有突變的kcat都降低。除L173Q外,其余突變都保持葡萄糖耐受性,在高濃度(400 mmol/L)葡萄糖時,Y179F和D237S酶活受到顯著抑制。本研究表明,進口端位點對酶活性及葡萄糖耐受性均具有一定影響,催化活性通道的結構特異性可能是葡萄糖耐受機制。
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