摘要:[目的]本文旨在克隆不結(jié)球白菜BcATPA(ATPase alpha subunit)基因并研究其功能及其在不育系和可育系中的表達差異。[方法]構(gòu)建BcATPA重組質(zhì)粒,在NCBI數(shù)據(jù)庫進行核苷酸序列分析,得到不結(jié)球白菜ATPA基因全長序列。利用實時定量PCR技術(shù)檢測BcATPA基因在不結(jié)球白菜保持系和不育系的不同組織和器官及不同小孢子發(fā)育時期的時空表達情況。[結(jié)果]獲得了不結(jié)球白菜ATPA基因全長序列,命名為BcATPA。該基因的核苷酸序列全長為1 806 bp,其最大開放閱讀框長度為1 527 bp,編碼508個包含F(xiàn)1-ATP酶α亞基保守區(qū)域的氨基酸,并且含有ATP結(jié)合、walker A motif和walker B motif等位點,而且在287~315的位置含有29個氨基酸的跨膜區(qū)域。BcATPA與蕓薹屬中的芥菜、甘藍型油菜和擬南芥親緣關系特別近,二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)預測表明,該基因與ATP結(jié)合有關。實時熒光定量PCR結(jié)果表明,BcATPA在不育系中的表達水平高于保持系,在花瓣、萼片中表達水平較高。在整個小孢子發(fā)育時期,不育系中BcATPA基因表達量逐漸降低;而在保持系中,從四分體時期開始顯著下降,因此不育系與保持系表達量差異逐漸加大。[結(jié)論]BcATPA基因在不結(jié)球白菜不育系和保持系的各個器官和整個小孢子發(fā)育時期的表達水平存在差異,研究結(jié)果為進一步研究BcATPA基因與細胞質(zhì)雄性不育之間的關系提供了理論依據(jù)。
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