摘要：2A肽的核糖體跳躍技術(shù)是一種新型技術(shù)。其2A肽是長(zhǎng)度為18~22個(gè)氨基酸的順式作用水解酶元件,具有結(jié)構(gòu)短小、蛋白分割效率高的特點(diǎn),因而被越來(lái)越多應(yīng)用于多順?lè)醋颖磉_(dá)載體的構(gòu)建中。該項(xiàng)技術(shù)目前主要集中于酵母(Saccharomyces cerevisiae)和哺乳動(dòng)物細(xì)胞的研究中,在植物中的報(bào)道較少。為探索該技術(shù)在植物中的應(yīng)用研究,本研究利用豬捷申病毒2A (Porcine teschovirus-1 2A, P2A)和東亞細(xì)亞病毒2A (Thosea asigna virus 2A, T2A),首次將人工合成的轉(zhuǎn)錄因子X(jué)VE (X, the DNA-binding domain of the bacterial repressor LexA;V, the acidic transactivating domain of VP16;E, the regulatory region of the human estrogen receptor)、綠色熒光蛋白基因(green fluorescent protein, GFP)和抗除草劑基因(bialaphos resistance,Bar)3個(gè)基因的開放閱讀框(open reading fragment, ORF)串聯(lián)后受35S啟動(dòng)子調(diào)控,構(gòu)建成多順?lè)醋庸脖磉_(dá)載體pX6-2A,轉(zhuǎn)化擬南芥(Arabidopsis thaliana)后經(jīng)PCR鑒定獲得了轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株;Western blot結(jié)果顯示XVE,GFP和Bar 3個(gè)目的蛋白全部被分割完成,說(shuō)明P2A和T2A肽在植物材料中可以轉(zhuǎn)錄、表達(dá)和翻譯,且在分割過(guò)程中不會(huì)互相干擾,是一種理想的多順?lè)醋颖磉_(dá)方式。本研究結(jié)果表明P2A和T2A在植物材料中能夠完成高效分割,行使其'核糖體跳躍'的功能,適用于在植物材料中的應(yīng)用研究,該研究結(jié)果對(duì)2A肽在轉(zhuǎn)基因植物中的推廣應(yīng)用具有重要的理論和借鑒意義。