摘要：通過觀察不同成分培養(yǎng)基及不同培養(yǎng)方法培養(yǎng)的斑節(jié)對蝦性腺組織及細(xì)胞原代培養(yǎng)生長情況,分析細(xì)胞活力及生長相關(guān)基因表達(dá)情況,判斷3種改良培養(yǎng)基的適用條件,為進(jìn)一步細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)提供支持。試驗(yàn)結(jié)果表明,以L-15培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,不同配方的培養(yǎng)效果差距較大,其中機(jī)械分離法可成功培養(yǎng)離體斑節(jié)對蝦性腺組織,而酶解法與3號培養(yǎng)基結(jié)合效果較好;在培養(yǎng)過程中可見離體卵母細(xì)胞多呈懸浮生長,部分可見分裂相,離體精原細(xì)胞多呈貼壁生長,1號、2號培養(yǎng)基中的細(xì)胞可維持良好生長狀態(tài)達(dá)一周以上;CCK測試結(jié)果表明,機(jī)械分離的性腺組織和酶解法分離的性腺細(xì)胞分別在1號、3號培養(yǎng)基中有更高的細(xì)胞活力,而2號培養(yǎng)基中的性腺組織及細(xì)胞在兩種培養(yǎng)方法下的活力差別不大。進(jìn)一步的熒光定量PCR檢測了離體培養(yǎng)過程中MAPK信號通路相關(guān)基因的表達(dá)變化情況,結(jié)果表明,Ras、c-Mos、MEK1、ERK基因在卵母細(xì)胞中表達(dá)變化更顯著,且c-Mos基因與離體細(xì)胞生長發(fā)育情況呈正相關(guān)。本試驗(yàn)系統(tǒng)性地篩選了適宜斑節(jié)對蝦性腺組織、細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法,為了解培養(yǎng)過程中的生理過程變化提供了相關(guān)參考數(shù)據(jù)。