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利用CRISPR/Cas9構(gòu)建斑馬魚tbx20基因突變體及其功能分析

作者:朱哲; 胡沛男; 李偉明; 祖堯 上海海洋大學(xué)科技部海洋生物科學(xué)國際聯(lián)合研究中心; 上海201306; 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)種質(zhì)資源發(fā)掘與利用教育部重點實驗室; 上海201306; 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)科學(xué)國家級實驗教學(xué)示范中心; 上海201306

摘要:轉(zhuǎn)錄因子TBX20在脊椎動物心臟的腔室發(fā)育和維護(hù)中起至關(guān)重要的作用。利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)成功制備了斑馬魚tbx20突變魚系,T7E1檢測結(jié)果顯示F0敲除效率平均為42. 1%,測序分析F1中突變種質(zhì)遺傳效率為36. 7%。F2突變體中觀察到心臟突變表型:48 hpf,心包腔腫大,靜脈竇瘀血,環(huán)化異常,心臟結(jié)構(gòu)變形;3 dpf,心臟畸形拉伸成線狀結(jié)構(gòu)。原位雜交和qRT-PCR結(jié)果顯示,突變體中vmhc表達(dá)上調(diào),amhc和myl7表達(dá)下調(diào)。成功制備了斑馬魚tbx20突變體,結(jié)果表明tbx20純合突變體心臟畸形,環(huán)化受到影響,為深入探究tbx20在早期心臟腔室分化過程中的作用奠定了基礎(chǔ)。

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上海海洋大學(xué)學(xué)報

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