摘要：實時熒光定量PCR是一種快速用于鑒定基因表達量的方法,廣泛用于微生物、植物和動物基因表達分析中。通過選取合適的內參基因β-actin構建珠子參實時熒光定量PCR體系,為珠子參及其近緣種的基因表達分析奠定基礎。主要從兩個最基本的要素進行體系優(yōu)化,即引物濃度和模板濃度。優(yōu)化先從模板濃度開始,設置模板濃度梯度分別為120ng/μL、24ng/μL、4.8ng/μL、0.96ng/μL、0.192ng/μL,基于擴增曲線和擴增效率的計算,得出擴增效率最高的一組,即為最優(yōu)模板濃度。然后進行引物濃度優(yōu)化,在最優(yōu)模板濃度基礎上設計一系列的引物濃度分別為10μmol/L、5μmol/L、2.5μmol/L、1.25μmol/L、0.625μmol/L,基于擴增曲線和擴增效率,確定最佳的引物濃度。實驗結果表明,當模板濃度為120ng/μL,引物濃度為10μmol/L時PCR的擴增效率最高。在珠子參中首次建立和優(yōu)化了以β-actin基因作為內參基因的實時熒光定量PCR體系。