摘要：目的構建用于呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus,RSV)體外拯救的RSV基因組全長cDNA克隆,并進行鑒定。方法根據(jù)RSVLong株基因組序列設計并合成引物,利用RT-PCR技術分6段擴增RSVLZ01/09基因組序列并構建克隆載體;測序后,利用重疊PCR與酶切連接技術,根據(jù)基因組序列選擇特異性酶切位點,引入KpnI、XmaI和SalI酶切位點,構建成4個亞克隆載體;將亞克隆載體的插入片段連接至經(jīng)過改造且包含T7啟動子、錘頭狀核酶、多克隆位點、丁肝核酶、T7終止子的pRSV1載體中,構建RSV基因組全長cDNA克隆;對克隆全長cDNA序列進行測定,與親本RSVLZ01/09基因組進行同源性比對分析,并與RSV實驗參比株進行系統(tǒng)進化樹分析。結果測序結果顯示,RSVLZ01/09的基因組全長為15204bp,與GenBank公布的RSV基因組序列長度相當,將完整的序列提交GenBank,登錄號為KY782635;酶切及測序結果顯示,用于RSV全長cDNA克隆構建的基本載體pBSKS-MCS(簡稱pRSV1)與預期相符,RSV全長基因組cDNA克隆質粒(簡稱轉錄載體pRSV1-4F)酶切片段大小與預期一致;同源性比對結果顯示,全長cDNA序列與親本RSVLZ01/09基因組序列同源性高達99.83%;系統(tǒng)進化樹分析結果顯示,其與RSV-A亞型序列同屬于一個分支。結論測序及酶切分析結果表明已成功構建RSVLZ01/09基因組全長cDNA克隆,為建立拯救RSV重組病毒的反向遺傳學系統(tǒng)平臺奠定了基礎。