摘要：目的構(gòu)建EB病毒潛伏期膜蛋白1(LMP1)基因的真核表達(dá)載體,通過電穿孔法轉(zhuǎn)染人B淋巴瘤細(xì)胞株Ramos細(xì)胞,建立穩(wěn)定的LMP1表達(dá)細(xì)胞株。方法擴(kuò)增帶有EcoRⅠ與BamHⅠ酶切位點(diǎn)的LMP1編碼基因,克隆至pcDNA3.1-EF1a-mcs-3FLAG-CMV-EGFP真核表達(dá)載體,挑取陽(yáng)性單克隆感受態(tài)細(xì)胞行PCR以及測(cè)序后將重組質(zhì)粒通過電穿孔法轉(zhuǎn)染Ramos細(xì)胞, G418篩選穩(wěn)定表達(dá)LMP1的細(xì)胞株, PCR和Western blot法分別檢測(cè)LMP1 mRNA和蛋白在Ramos細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果 PCR與測(cè)序證實(shí)成功構(gòu)建了LMP1重組質(zhì)粒,建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的Ramos細(xì)胞,且LMP1蛋白可在細(xì)胞中成功表達(dá)。結(jié)論成功建立了穩(wěn)定表達(dá)LMP1的Ramos細(xì)胞。