摘要：目的探索大鼠絲裂原活化蛋白激酶激酶7（mitogen activated protein kinase kinase7，MKK7）基因在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的表達(dá)調(diào)控規(guī)律。方法利用分子生物學(xué)方法將大鼠MKK7全長cDNA序列克隆到編碼增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein，eGFP）和Flag（編碼DYKDDDDK親水性多肽）標(biāo)簽的真核表達(dá)載體Pvpl6-AD中，構(gòu)建出Pvpl6-Flag-MKK7-eGFP重組質(zhì)粒。通過酶切及DNA測序的方法驗(yàn)證重組質(zhì)粒序列的正確性后，采用脂質(zhì)體介導(dǎo)方法將重組質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染COS7細(xì)胞，通過熒光顯微鏡觀察質(zhì)粒與脂質(zhì)體不同比例情況下以及確定最高轉(zhuǎn)染效率的比例后不同時(shí)間段大鼠MKK7基因表達(dá)情況。結(jié)果成功構(gòu)建重組真核表達(dá)質(zhì)粒Pvpl6-Flag-MKK7-eGFP。酶切及DNA測序方法確定重組質(zhì)粒中大鼠MKK7序列與原序列一致。重組質(zhì)粒與脂質(zhì)體的比例為1：3時(shí)，重組質(zhì)粒在COS7細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率最高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〈0．05）。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后72h時(shí)，COS7細(xì)胞中MKK7蛋白表達(dá)量相對最高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〈0．05）。結(jié)論大鼠MKK7重組真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在COS7細(xì)胞中轉(zhuǎn)染效率的探索工作為研究大鼠MKK7基因在體外引起細(xì)胞分化、增殖、凋亡、炎癥反應(yīng)和應(yīng)激反應(yīng)等一系列生物學(xué)改變奠定基礎(chǔ)。