摘要：目的探究mieroRNA-195-5p (miR-195-5p)對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞侵襲和遷移能力及宮頸癌腫瘤移植模型小鼠存活的影響。方法RT-PCR檢測(cè)宮頸癌患者癌組織及癌旁組織、正常宮頸上皮細(xì)胞NC104和宮頸癌細(xì)胞株HeLa、CaSki、C33A和SiHa中miR-195-5p和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A (vascular endothelialgrowth factor A, VEGFA)的 niRNA 水平。miR-195 mimic 轉(zhuǎn)染細(xì)胞,RT-PCR 檢測(cè) miR-19-5p 和 VEGFA 的表達(dá)。熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-195-5p和VEGFA靶向關(guān)系。miR-195 mimic和pcDNA VEGFA ( pc-VEGFA)分別或同時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞.免疫印跡檢測(cè)VEGFA表達(dá),MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖,流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡,Transwell和劃痕實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)細(xì)胞侵襲和遷移能力,免疫印跡檢測(cè)Ki67、Bel-2 , Bax、VEGF受體1 (VEGF receptor1, VEGFR1),基質(zhì)金屬蛋白酶-2 (metalloproteinase-2, MMP-2)和MMP-9的表達(dá)。建立宮頸癌移植瘤裸鼠模型,記錄小鼠存活情況及腫瘤體積,Tunnel檢測(cè)腫瘤組織細(xì)胞凋亡情況,免疫組化檢測(cè)Ki67表達(dá),免疫印跡檢測(cè)VEGFR1、MMP-2和MMP-9的表達(dá)。結(jié)果與癌旁組織比較,癌組織miR-195-5p表達(dá)水平明顯降低,VEGFA表達(dá)水平明顯升高;與NC104細(xì)胞比較,miR-195-5p在多類宮頸癌細(xì)胞中表達(dá)顯著升高,VEGF RNA水平明顯降低。miR-195 mimic能顯著上調(diào)miR-195-5p表達(dá)水平,抑制VEGFA RNA表達(dá),并且能降低VEGFA野生質(zhì)粒(wild type, wt)熒光素酶活性。pc-VEGFA能顯著促進(jìn)VEGFA表達(dá),miR-195 mimic能顯著降低HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)速度和Ki67、Bcl-2表達(dá)水平,上調(diào)細(xì)胞凋亡率及Bax表達(dá)水平;pc-VEGFA 能顯著減弱miR-195 mimic對(duì)細(xì)胞增殖、Ki67和Bcl-2表達(dá)的抑制作用和對(duì)細(xì)胞凋亡及Bax表達(dá)的誘導(dǎo)作用。同時(shí),miR-195 mimic能減少HeLa細(xì)胞侵襲數(shù)并降低細(xì)胞遷移率,抑制VEGFR1、MMP-2和MMP-9表達(dá),pc-VEGFA能顯著減弱miR-195 mimic對(duì)細(xì)胞侵襲和遷移的抑制作用;此外,與Control組比較,miR-195 mimic組模型小鼠存活率明顯升高,腫瘤生長(zhǎng)明顯被抑制,腫瘤組織細(xì)胞細(xì)胞凋亡率明顯升高,VEGF