摘要：目的人的ABO血型常規(guī)免疫學(xué)檢測方法不適用于實(shí)驗(yàn)猴獼猴血型檢測,而實(shí)驗(yàn)猴血型鑒定在器官移植等研究中必不可少。本研究目的是建立一個(gè)快速、可靠的恒河猴與食蟹猴ABO血型核酸鑒定方法。方法本室建立了一種新的ABO血型的分子學(xué)檢測方法,利用競爭性等位基因PCR(KASP)技術(shù),通過識別與血型密切相關(guān)功能基因的2個(gè)SNP位點(diǎn)上的堿基,對恒河猴與食蟹猴血型進(jìn)行分型,并通過設(shè)計(jì)2個(gè)SNP位點(diǎn)外圍的普通PCR引物,對KASP方法鑒定出的血型樣本進(jìn)行Sanger測序鑒定。結(jié)果比對了15份用TaqmanPCR方法已確定血型的食蟹猴全血核酸樣本,新建立的KASP分型結(jié)果與原血型結(jié)果完全一致,為了保證KASP方法鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性,實(shí)驗(yàn)人員用新建立的普通PCR方法通過Sanger測序驗(yàn)證了KASP方法與測序結(jié)果完全一致。為了對新建的KASP方法重復(fù)性進(jìn)行驗(yàn)證,選取了已知血型的6份實(shí)驗(yàn)猴全血,每份血樣做5個(gè)重復(fù),結(jié)果顯示該方法有極好的重復(fù)性。進(jìn)一步用新建的KASP方法檢測了51份臨床樣本,其中食蟹猴樣本38份,恒河猴樣本13份,同一樣本的2個(gè)位點(diǎn)的血型結(jié)果完全一致,其中A型血9份(17.6%),B型血19份(37.3%),AB型血23份(45.1%),未檢出O型血。同時(shí)從A型、B型、AB型的臨床樣本中,各型分別選了5個(gè)樣本,進(jìn)行普通PCR擴(kuò)增及測序分析,證明2個(gè)SNP位點(diǎn)上的序列與KASP分型結(jié)果一致。結(jié)論新建的KASP血型鑒定方法準(zhǔn)確性高,可用于實(shí)驗(yàn)恒河猴與食蟹猴的ABO血型的快速檢測。該方法相較于傳統(tǒng)的血清學(xué)或測序方法,簡單快捷,經(jīng)濟(jì)可靠,結(jié)果易于判讀,同時(shí)對樣本的要求比傳統(tǒng)的血清學(xué)方法低,新鮮或存放較久的全血、唾液或核酸等都可以用于檢測。