摘要:【目的】為明確水稻矮縮病毒(Ricedwarfvirus,RDV)Pns6和P8蛋白在病毒侵染水稻原生質(zhì)體后的表達(dá)動態(tài),【方法】利用PEG介導(dǎo)的病毒侵染原生質(zhì)體體系,通過免疫熒光和電鏡技術(shù)分析Pns6、P8蛋白以及病毒粒體在水稻原生質(zhì)體中的定位;同時,通過Western blot和實時熒光定量PCR分析Pns6和P8蛋白及其RNA在水稻原生質(zhì)體中的積累量。【結(jié)果】病毒接種水稻原生質(zhì)體48h后,Pns6蛋白在細(xì)胞質(zhì)中可以形成類似于病毒原質(zhì)(viroplasm)的點(diǎn)狀內(nèi)含體,P8蛋白也大量的表達(dá)。同時,病毒粒體在水稻原生質(zhì)體中也形成內(nèi)含體狀的結(jié)構(gòu)。病毒接種水稻原生質(zhì)體12h后,均可檢測到Pns6和P8蛋白的表達(dá),并且在36h后達(dá)到最高值。病毒接種水稻原生質(zhì)體后,Pns6RNA在24h時表達(dá)量達(dá)到最高,P8RNA在36h時表達(dá)量達(dá)到最高?!窘Y(jié)論】RDV侵染水稻原生質(zhì)體后,Pns6和P8蛋白均有表達(dá),并且病毒也可能通過形成病毒原質(zhì)來完成病毒在寄主細(xì)胞的復(fù)制和裝配。
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