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miR-17-5p靶向自噬相關蛋白ATG7調控巨噬細胞抗結核分枝桿菌感染作用的研究

作者:洪丹彤; 張帆; 王淑娥; 王紅霞; 劉昆梅; 徐廣賢; 霍正浩; 郭樂 寧夏醫(yī)科大學臨床醫(yī)學院; 銀川7500212; 寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院寧夏臨床病原微生物重點實驗室; 銀川750021; 寧夏醫(yī)科大學顱腦疾病重點實驗室; 銀川750021; 寧夏醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院寧夏生殖與遺傳重點實驗室; 銀川750021

摘要:目的:通過研究miR-17-5p對自噬相關基因ATG7的靶向調控機制和對細胞自噬的作用,探究miR-17-5p在結核分枝桿菌介導的自噬途徑中的作用及其機制。方法:生物信息學分析得到miR17-5p的靶基因ATG7,通過成功構建載體ATG7野生型(pMirGLO-ATG7-3'UTR-WT)和突變型,利用雙螢光素酶報告系統、Western blot驗證miR-17-5p和ATG7的靶向關系,同時構建結核分枝桿菌(H37Ra)感染的人源性THP-1巨噬細胞模型,將做不同處理的細胞分為三組:miR-17-5p mimics、miR-17-5p inhibitor、miR-17-5p nc。通過實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)檢測H37Ra感染對miR-17-5p表達量的影響,并且進一步通過Western blot、免疫熒光觀察檢測LC3蛋白的表達量和自噬小體的數量。結果: MTB感染能夠引起miR-17-5p的下調,隨著感染復數的增加有明顯的降低。而生物信息學預測結果顯示miR-17-5p與ATG7具有靶向性,雙螢光素酶報告實驗、Western blot驗證miR-17-5p能夠和ATG7靶向結合,并對其進行負調控。進一步通過Western blot、免疫熒光觀察發(fā)現miR-17-5p mimics組LC3Ⅱ的表達下調,自噬小體表達降低,而miR-17-5p inhibitor組相反。其中對H37Ra感染組與未感染組之間比較,ATG7和LC3Ⅱ蛋白表達明顯增強。結論: miR-17-5p直接靶向結合ATG7 3'UTR抑制自噬,在巨噬細胞抗MTB過程中發(fā)揮作用。

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