摘要：為建立檢測藍舌病病毒(BTV)和流行性出血病病毒(EHDV)的快速診斷方法,筆者根據BTV的第10基因節(jié)段(Seg-10)和EHDV的第5基因節(jié)段(Seg-5)序列,分別設計BTV與EHDV的特異性引物和TaqMan探針,經過反應條件優(yōu)化,建立了同時檢測兩種病毒的雙重熒光定量RT-PCR方法,并進行了特異性、靈敏度、重復性和臨床樣品檢測驗證。用該方法對BTV Seg-10和EHDV Seg-5節(jié)段的體外轉錄ssRNA為模板繪制標準曲線,相關系數(R~2)均大于0.995,線性關系較好;該方法可檢測不同血清型的BTV和EHDV,與阿卡斑病病毒(AKAV)、中山病病毒(CHUV)、小反芻獸疫病毒(PPRV)、口蹄疫病毒(FMDV)和牛流行熱病毒(BEFV)無交叉反應,表明該方法特異性強;對2種標準品的檢出極限均為10 copies/uL,比常規(guī)RT-PCR敏感性高10倍;組內和組間重復試驗的變異系數均小于2%;用所建立的雙重熒光定量RT-PCR方法及常規(guī)RT-PCR方法,對100份血液樣品和50份病毒液分別進行檢測,符合率均大于90%。以上結果表明所建立的雙重熒光定量RT-PCR方法具有快速、準確、敏感和穩(wěn)定等優(yōu)點,為BTV和EHDV感染的早期快速診斷、高通量檢測及流行病學調查提供了有效的技術方法。