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偽狂犬病病毒UL56蛋白與宿主蛋白Nedd4相互作用的研究

作者:王書文; 呂闖; 蔡雪輝 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院; 吉林長(zhǎng)春130118; 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 黑龍江哈爾濱150069

摘要:偽狂犬病病毒(PRV)UL56蛋白(pUL56)屬于Ⅱ型膜蛋白。近期研究結(jié)果表明PRVpUL56與PRV對(duì)嚙齒動(dòng)物的致病性相關(guān)。為揭示PRVpUL56與宿主相互作用的分子基礎(chǔ),本研究通過免疫共沉淀(Co-IP)試驗(yàn)確定了pUL56與神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)的發(fā)育下調(diào)蛋白4(Nedd4)存在相互作用。進(jìn)一步,利用激光共聚焦試驗(yàn)確定過表達(dá)pUL56與Nedd4在轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞的高爾基體存在共定位。通過互作,pUL56可以將細(xì)胞質(zhì)分布的Nedd4重新定位于高爾基體。前期研究表明,含有WW結(jié)構(gòu)域的宿主蛋白可以與含有PPxY(PY)基序的病毒蛋白互作。因此,本研究構(gòu)建了pUL56PY基序丙氨酸突變體(PPxY/AAxY),利用Co-IP試驗(yàn)對(duì)pUL56突變體和Nedd4相互作用進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果表明隨著pUL56PY基序突變的增加,蛋白互作能力逐漸減弱。此外,pUL56通過其PY基序顯著下調(diào)Nedd4的表達(dá)。這些結(jié)果證實(shí)了PRVpUL56與Nedd4主要通過WW結(jié)構(gòu)域/PY基序模式發(fā)揮相互作用,并下調(diào)Nedd4的表達(dá)。因此,本研究為闡明PRVpUL56與宿主相互作用的分子機(jī)制提供了參考依據(jù)。

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