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沉默HIF-1α基因?qū)87細胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移能力的影響

作者:沈上杭; 陳玉英; 王占祥 廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)外科; 廈門361003

摘要:目的觀察沉默低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)基因后對膠質(zhì)母細胞瘤U87細胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移能力的影響。方法實驗分3組,干擾組(轉(zhuǎn)染表達HIF-1α-shRNA的質(zhì)粒)、對照干擾組件(轉(zhuǎn)染陰性對照shRNA序列)及未處理組。干擾組利用前期構(gòu)建的HIF—1α基因的短發(fā)夾RNA(shRNA)沉默HIF-1α基因,構(gòu)建HIF-1α-shRNA慢病毒表達載體,存脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染人膠質(zhì)母細胞瘤細胞U87。采用RT-PCR和Westernblotting檢測HIF-1α基因干擾效率.MTT法檢測細胞生長增殖能力,遷移實驗檢測細胞的體外遷移能力,Transwell小室模型檢測細胞的體外侵襲及轉(zhuǎn)移能力。結(jié)果RT—PCR和Westernblotting實驗證實,與對照干擾組及未處理組比較,十?dāng)_組細胞月HIF-1α mRNA表達水平明顯下降,蛋白條帶明顯減弱。MTT細胞增殖實驗顯示,干擾組細胞增殖水平較其他2組明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P〈0.05)。Transwell小室侵襲實驗中,未處理組、對照干擾組、干擾組穿膜細胞數(shù)分別為(125.2±10.8)個、(118.3±8.3)個、(60.9±5.4)個,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P〈0.05)。結(jié)論HIF-1α—shRNA能有效抑制U87細胞株HIF-1α mRNA及蛋白的表達.并能抑制U87細胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移能力。

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