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腺病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人生長轉(zhuǎn)化因子β1的脂肪干細(xì)胞復(fù)合多孔β-磷酸三鈣支架體外培養(yǎng)的研究

作者:方忠; 楊琴; 熊偉; 李光輝; 肖駿; 李鋒 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院骨科; 武漢430030

摘要:目的觀察腺病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人生長轉(zhuǎn)化因子β1(Ad—hTGF—β1)的脂肪干細(xì)胞(ADSCs)與多孔β-磷酸三鈣(β-TCP)支架材料在體外復(fù)合培養(yǎng),探討它們之間的相容性以及其構(gòu)建組織工程軟骨的可行性。方法含增加型綠色熒光蛋白(EGFP)基因的腺病毒表達(dá)載體pAd—hTGF-β1,經(jīng)包裝、轉(zhuǎn)染兔脂肪干細(xì)胞,篩選出成功轉(zhuǎn)染Ad—hTGF-β1的ADSCs,然后將攜Ad—hTGF—β1的ADSCs(密度1×10^6個(gè)/m1)與多孔β-磷酸三鈣支架中行三維立體復(fù)合培養(yǎng),定期掃描電鏡觀察細(xì)胞黏附能力、增殖活力以及形態(tài)學(xué)改變,并通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)、Western blot法和免疫組織化學(xué)法檢測軟骨特異性細(xì)胞外基質(zhì)蛋白Ⅱ型膠原蛋向(CollagenⅡ)的表達(dá)。結(jié)果多孔β—TCP支架孔徑在300~450μm之間,孔隙率65%;掃描電鏡顯示Ad—hTGF-β1的ADSCs與β—TCP支架材料在體外培養(yǎng)期間支架無塌陷及形變,且在支架上黏附、增殖良好,并能分泌軟骨細(xì)胞外基質(zhì)collagen Ⅱ,其分泌隨時(shí)間呈增加的趨勢。結(jié)論多孔β—TCP支架具有適宜的微孔結(jié)構(gòu)、良好的生物相容性和軟骨誘導(dǎo)作用,可以作為軟骨組織工程較理想的支架材料。且其與轉(zhuǎn)染Ad—hTGF—β1的ADSCs相結(jié)合有望構(gòu)建組織工程軟骨。

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