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五氯酚鈉誘導(dǎo)斑馬魚(yú)體細(xì)胞p53基因突變的克隆測(cè)序研究

作者:夏勇; 徐彩菊; 傅劍云; 宋燕華; 蔡德雷; 孟真 浙江省疾病預(yù)防控制中心; 浙江杭州310051

摘要:目的研究五氯酚鈉(NaPCP)對(duì)斑馬魚(yú)體細(xì)胞p53基因的致突變作用。方法設(shè)置5個(gè)不同濃度的NaPCP暴露組及空白對(duì)照組,采用Tubingen品系斑馬魚(yú)進(jìn)行斑馬魚(yú)急性毒性試驗(yàn)計(jì)算半數(shù)致死濃度(LC50),并依據(jù)急性毒性實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果,設(shè)置1/10 LC50暴露劑量,暴露組與空白對(duì)照組各取10尾斑馬魚(yú),在連續(xù)暴露45 d后提取斑馬魚(yú)肝臟組織RNA,采用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增p53基因c DNA序列,并進(jìn)行測(cè)序分析。結(jié)果NaPCP急性毒性實(shí)驗(yàn)所得LC50為18.4μg/L,測(cè)序分析結(jié)果顯示斑馬魚(yú)p53基因編碼區(qū)序列長(zhǎng)1125 bp,編碼374個(gè)氨基酸,與Gen Bank已知Tubingen品系斑馬魚(yú)p53序列(GI:425876786)同源性為99.2%,與其他生物物種的p53序列存在一定差異。在NaPCP 1.8μg/L濃度下暴露45 d后,與對(duì)照組比較,暴露組斑馬魚(yú)p53基因序列的8、148和229位密碼子發(fā)生GAG→AAG、CAT→CAG和CAG→CAA突變,導(dǎo)致所編碼的p53蛋白發(fā)生Glu→Lys和His→Gln變異。結(jié)論 NaPCP是一種致基因突變物,可誘導(dǎo)斑馬魚(yú)體細(xì)胞p53基因發(fā)生突變,對(duì)人體可能有潛在的致基因突變風(fēng)險(xiǎn)。

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