摘要：目的:基于NF-κB信號通路探討獨活寄生湯抑制脂多糖誘導的軟骨細胞炎癥反應的作用機制。方法:取4周齡SPF級SD大鼠雙側(cè)膝關(guān)節(jié)軟骨,分離軟骨細胞進行體外培養(yǎng)。取培養(yǎng)的第2代軟骨細胞,隨機分為5組?？瞻捉M中加入含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基,模型組加入含10 ng·mL^-1 脂多糖的10%FBS DMEM培養(yǎng)基,獨活寄生湯低、中、高濃度組加入含脂多糖(10 ng·mL ^-1 )和獨活寄生湯(濃度分別為100 μg·mL^-1 、200 μg·mL^-1 、300 μg·mL ^-1 )的10%FBS DMEM培養(yǎng)基。干預8 h后,采用ELISA法測定各組細胞培養(yǎng)液上清液中的基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9含量,確定獨活寄生湯最佳干預濃度。隨后取培養(yǎng)的第2代軟骨細胞,隨機分為4組?？瞻捉M不進行干預,模型組加入10 ng·mL ^-1 脂多糖,獨活寄生湯組加入10 ng·mL^-1 脂多糖和最佳濃度的獨活寄生湯,抑制劑組加入10 ng·mL ^-1 脂多糖和10 μmol吡咯烷二硫代甲酸銨鹽。干預8 h后,采用熒光定量PCR法檢測軟骨細胞中NF-κB基因含量、用免疫熒光檢測法觀察軟骨細胞中NF-κB蛋白核轉(zhuǎn)位情況。結(jié)果:①獨活寄生湯最佳干預濃度測定結(jié)果?？瞻捉M、模型組、獨活寄生湯低濃度組、獨活寄生湯中濃度組、獨活寄生湯高濃度組的MMP-9含量比較,差異有統(tǒng)計學意義[(0.125±0.012)ng·mL ^-1 ,(0.154±0.008)ng·mL^-1 ,(0.148±0.012)ng·mL ^-1 ,(0.148± 0.010)ng·mL ^-1 ,(0.134±0.002)ng·mL^-1 ,χ^ 2=10.034,P =0.040]。模型組的MMP-9含量高于空白組和獨活寄生湯高濃度組( P=0.002,P =0.006);空白組與獨活寄生湯高濃度組比較,差異無統(tǒng)計學意義( P =0.573);獨活寄生湯低、中濃度組MMP-9含量與模型組比較,差異均無統(tǒng)計學意義( P=0.483,P =0.356)。上述測定結(jié)果顯示獨活寄生湯最佳干預濃度為 300 μg·mL ^-1 。②軟骨細胞中NF-κB基因含量?？瞻捉M、模型組、獨活寄生湯組、抑制劑組的NF-κB基因含量比較,差異有統(tǒng)計學意義[1.